Ferramentas para a construção de um ensaio sorológico utilizando a proteína sMTL-13 do Mycobacterium tuberculosis

Abstract

A tuberculose bovina (bTB) é uma importante enfermidade infectocontagiosa causada pela bactéria intracelular Mycobacterium bovis. Em vários países, inclusive no Brasil, os programas de controle da bTB se baseiam na resposta de um teste intradérmico, que tem como característica avaliar uma resposta de hipersensibilidade tardia após a inoculação de um antígeno micobacteriano (PPD). No entanto, os mesmos são considerados limitados quanto a sua especificidade e sensibilidade. Diante disso, é sabido que o diagnóstico intradérmico sozinho não é uma ferramenta segura para detectar todos os animais positivos no rebanho bovino, sendo necessário outros ensaios auxiliares para o controle e erradicação da bTB. Neste sentido, buscou-se avaliar ferramentas para a construção de um ensaio de ELISA, utilizando uma proteína altamente antigênica de Mycobacterium tuberculosis (Mtb) que possui aproximadamente 100% de identidade com Mycobacterium bovis. A lectina de 13 kDa secretada por Mtb (sMTL-13) em estudos anteriores demonstrou ser um importante antígeno para a utilização em testes diagnósticos por induzir respostas imunes celulares e humorais. Com base nisso, avaliou-se a concentração de amostras da proteína sMTL-13, bem como a especificidade de anticorpos anti-HIS e anti-sMTL-13 purificado para a detecção da proteína através do ensaio de Immunoblotting. Além disso, realizou-se a imunização de camundongos com a finalidade de obter os soros pré-imune e imune. Todas essas etapas em conjunto servirão como elementos para a padronização de um teste de ELISA. Esse teste diagnóstico nacional com alta especificidade, sensibilidade e alta capacidade de testagem, futuramente poderá complementar a tuberculinização no programa de erradicação da bTB.