Papel da proteína de interação com a orredoxina (Txnip) na interrelação entre a autofagia e o inflamassoma: padronização do fracionamento subcelular concomitante das frações citoplasmáticas, nucleares e mitocondriais de tecidos cerebrais

Abstract

O isolamento de frações nucleares, citosólicas e mitocondriais com razoável pureza de tecidos e células de mamíferos tem gerado um grande interesse, pois tem a vantagem de permitir a caracterização de diferentes organelas, e determinar a localização e o tráfego de proteínas entre os mais diversos compartimentos celulares. Neste trabalho, nós descrevemos um método de fracionamento subcelular baseado em subsequentes centrifugações, onde é possível obter as frações enriquecidas de citoplasma, núcleo e mitocôndria em uma mesma preparação. Nesta metodologia foram analisadas amostras dos tecidos cerebrais de córtex e hipocampo. Para a validação da pureza das frações foi utilizada a análise de Western Blot, onde foi verificado o imunoconteúdo de proteínas marcadoras específicas para cada compartimento celular, sendo elas Peroxirredoxina 3 e Citrato Sintase (mitocondriais), Lamina B (nuclear) e Glutationa Redutase (citoplasmática). Também, realizamos a análise da atividade enzimática das enzimas citoplasmáticas Lactato Desidrogenase e Glutationa 6 Fosfato Desidrogenase, bem como das enzimas mitocôndrias Succinato Desidrogenase e Citocromo C oxidase. Como conclusão temos que este método rápido e de baixo custo permitiu o isolamento com grande pureza das frações enriquecidas de citoplasma, núcleo e mitocôndria em amostras de fatias de hipocampo e córtex cerebral.