Criopreservação de sementes e caracterização morfo-histológica da germinação in vitro de Catteya crispa Lindl.

Abstract

Cattleya crispa é uma orquídea endêmica, com distribuição geográfica restrita à Mata Atlântica, que está seriamente ameaçada pela perda de habitat. C. crispa está presente na Lista Vermelha da Flora Brasileira e é protegida pelo anexo II da Convenção sobre o Comércio Internacional de Espécies Ameaçadas de Fauna e Flora Silvestres (CITES). A espécie em estudo possui valor de uso devido a sua rara beleza e pertence ao gênero Cattleya que possui ampla capacidade de recombinação genética, tendo potencial para melhoramento genético. Os objetivos desse trabalho foram desenvolver um protocolo de criopreservação de sementes, bem como estudar o desenvolvimento inicial in vitro, visando produzir dados que subsidiem o estabelecimento de estratégias de uso sustentável e conservação para a espécie. Sementes de C. crispa foram criopreservadas pela técnica de imersão direta em nitrogênio líquido, posteriormente foram descongeladas em banho maria, desinfestadas com hipoclorito de sódio e inoculadas em meio de cultura MS. Sementes submetidas a criopreservação resultaram em alta taxa de germinação (81,14%). Esse potencial de germinação, após a exposição ao NL, provavelmente, está relacionado ao baixo teor (5%) de água inicial da semente. Por outro lado, a porcentagem de sobrevivência dos protocormos não criopreservados (8,48%) e criopreservados (11,12%) avaliados cinco meses após a semeadura, foi reduzida. As análises de MEV revelaram que as sementes tem o tegumento persistente, que, apesar de não influenciar o início da germinação, comprime o protocormo ocasionando sua morte. Nas análises morfológicas e histológicas observa-se que o embrião tem uma germinação homogênea, que ocorre aos 7 dias de cultivo. O embrião é formado por protoderme e promeristema. Avaliações ultraestruturais do embrião revelaram que ele é composto principalmente de corpos lipídicos e proteicos e contém alguns pequenos grãos de amido. Os resultados obtidos no presente trabalho, configuram-se como o primeiro estudo de criopreservação de sementes e do processo de germinação de C. crispa.<br>

Abstract : Cattleya crispa is an endemic orchid, with geographic distribution restricted to the Atlantic Forest, which is seriously threatened by the loss of habitat. C. crispa is on the Brazilian Red List and is protected by Annex II to the Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora (CITES). The species under study has a use value due to its rare beauty and belongs to the Cattleya genus, which has a large capacity for genetic recombination and has potential for genetic improvement. The objectives of this work were to develop a protocol for cryopreservation of seeds, as well as to study the initial in vitro development, aiming to produce data that support the establishment of sustainable use and conservation strategies for the species. Seeds of C. crispa were cryopreserved by direct immersion in liquid nitrogen, later thawed in water bath, disinfested with sodium hypochlorite and inoculated in MS culture medium. Seeds submitted to cryopreservation resulted in a high germination rate (81.14%). This germination potential, after exposure to NL, is probably related to the low content (5%) of initial seed water. On the other hand, the percentage of survival of non-cryopreserved (8.48%) and cryopreserved (11.12%) protocorms evaluated five months after sowing was reduced. SEM analysis revealed that the seeds have a persistent seed coat which, although it does not influence the germination, compresses the protocorm, causing its death. In the morphological and histological analyzes it is observed that the embryo has a homogeneous germination, which occurs at 7 days of culture. The embryo is formed by protoderm and promeristem. Ultrastructural evaluations of the embryo revealed that it is composed mainly of lipid and protein bodies and contains some small starch grains. The results obtained in the present work, are configured as the first study of seed cryopreservation and the process of germination of C. crispa.