Papel do eixo ácido siálico-siglecs na infecção de neutrófilos por Trypanosoma cruzi

Abstract

O agente etiológico causador da doença Doença de Chagas é o Trypanosoma cruzi. Um dos mecanismos conhecidos de evasão do sistema imune que algumas cepas de T. cruzi utilizam é através da enzima Trans-Sialidase (TS), que transfere o ácido siálico presente na superfície das células do hospedeiro para incorporar na sua própria estrutura. Os ácidos siálicos são um importante componente no reconhecimento, adesão e sinalização celular. Os receptores Siglec reconhecem carboidratos do tipo ácido siálico através de domínios extracelulares e são encontrados em sua maioria em células do sistema imune como os neutrófilos. A hipótese do trabalho é que o T. cruzi (cepa Tulahuén) infecta neutrófilos humanos através do reconhecimento de receptores Siglec-5 e/ou -9. Os resultados mostraram que os neutrófilos humanos isolados foram infectados pelas formas tripomastigotas de T. cruzi tanto no MOI 1 (9,6 ± 1 %) quanto no MOI 5 (25 ± 1 %) e que o pré-tratamento com os anticorpos neutralizantes reduziu a porcentagem de células infectadas tanto com anti-hSiglec-5/14 (47,75% ± 4,36, p<0,01) como anti-hSiglec-9 (43% ± 6,7, p<0,01). Além disso, foi observado que Siglec-9 (4,84%), mas não Siglec-5 (0,60%) se liga na superfície do parasito. Os resultados de expressão mostraram uma diminuição dos receptores de Siglec-5 (1974 ± 1137) (p=0,776) e um aumento na expressão dos receptores de Siglec-9 nos neutrófilos após a infecção (1517 ± 395) (p=0,185). Concluindo, os neutrófilos humanos isolados são infectados por formas tripomastigotas de Trypanosoma cruzi (cepa Tulahuén) in vitro por um possível mecanismo dependente do eixo ácido siálico-Siglec.

Abstract : Trypanosoma cruzi is the causative agent of Chagas s disease. The use of the Transialidase (TS) enzyme is one of the known mechanisms used to evade immune system in vertebrates. This enzyme cleaves and transfer sialic acid from the host cell to its own surface. Sialic acids are crucial in vertebrate s cell-to-cell communication, adhesion and cellular signaling. Siglec family receptors play an important role in this context; they recognize sialic acid on their extracellular domain to activate endocytosis and activate inhibitory intracellular pathways. These receptors are found mainly in immune cells surface such as neutrophils. The hypothesis is that T. cruzi (Tulahuén strain) infects human neutrophils through binding on Siglec-5 and/or Siglec-9 receptors. Our results showed that isolated human neutrophils are infected by T. cruzi (Tulahuén strain) in both MOI 1 (9,6 ± 1 %) and MOI 5 (25 ± 1 %) and the pre-treatment with neutralizing antibodies reduced the infection in both anti-hSiglec-5/14 (47,75% ± 4,36, p<0,01) and anti-hSiglec-9 (43% ± 6,7, p<0,01). Additionally, we observed that Siglec-9 (4,84%) but not Siglec-5 (0,60%) bind on Tulahuén strain s surface. The expression of Siglec-5 decreased (1974 ± 1137) (p=0,776) and Siglec-9 increased (1517 ± 395) (p=0,185) in human neutrophils after infection. To conclude, tripomastigotas forms of Tulahuén strain infect isolated human neutrophils in vitro and this mechanism is suggested to be dependent of sialic acid-Siglec axis.