Expressão heteróloga de uma trans-sialidase de Trypanosoma cruzi por Trypanosoma rangeli

Abstract

O Trypanosoma rangeli é um parasito hemoflagelado, com capacidade de infectar animais incluindo o homem, nas Américas Central e do Sul. Sua distribuição geográfica, reservatórios e vetores são compartilhados com o Trypanosoma cruzi, agente etiológico da doença de Chagas. As Trans-sialidases (TS) de T. cruzi estão relacionadas ao processo de interação, penetração do parasito na célula hospedeira e seu escape do vacúolo fagocítico. O T. rangeli possui alguns genes da família das TS, não possuindo nenhuma atividade catalítica como perfaz algumas TS de T. cruzi (TcTS). O objetivo do presente estudo foi realizar a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi em T. rangeli buscando a geração de uma ferramenta para estudos da interação celular patógeno-hospedeiro. Para tanto, a partir da construção plasmidial que possui o gene da TcTS de T. cruzi foi confirmada a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi por T. rangeli por western blot e por microscopia de fluorescência. Ainda que preliminares, foram realizados ensaios de atividade TS nos parasitos transfectados. Os resultados confirmaram a expressão heteróloga da TcTS de T. cruzi por T. rangeli, além de apontar que o parasito transfectado possui uma TS ativa.

Trypanosoma rangeli is an hemoflagellate parasite, with ability to infect animals including humans, in Central and South America. Geographical distribution, reservoirs and vectors are shared with Trypanosoma cruzi, etiological agent of Chagas disease. The trans-sialidases (TS) of T. cruzi are related to the processes of interaction, penetration of the parasite in the host cell and its evasion from parasitophorus vacuole T. rangeli revealed to have genes similar to TS family members but with no catalytic activity has been proved so far, as TS of T. cruzi (TcTS). The goal of this study was to perform the heterologous expression of TcTS of T. cruzi by T. rangeli to generate a tool for the study of host-pathogen interaction. Heterologous expression of TcTS by T. rangeli was confirmed by western blot and by fluorescence microscopy using antibodies directed to the catalytic site and terminal repeats of TcTS (SAPA). Although preliminary, TS activity tests in transfected flagellate was performed. The results confirm the heterologous expression of TcTS of T. cruzi by T. rangeli, in addition to pointing out that the transfected parasite has an active TS.