Caracterização imunofenotípica de diferentes linhagens de plasmocitomas murinos utilizadas na produção de anticorpos monoclonais. –

Abstract

Anticorpos monoclonais são importantes reagentes utilizados na pesquisa biomédica, em testes de diagnóstico, bem como no tratamento de enfermidades. Sua produção em larga escala foi possível através da metodologia proposta por Kohler & Milstein que consiste na fusão de linfócitos B de camundongos imunizados com células de linhagem de plasmocitoma murino não produtores de imunoglobulinas. Essa fusão dá origem a células secretoras conhecidas como hibridomas que são os responsáveis pela produção de anticorpos monoclonais. Dentre as linhagens de plasmocitoma atualmente utilizadas para produção de anticorpos monoclonais estão P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14 e NS1. Apesar de estabelecidas há muito tempo, pouco se conhece sobre estas linhagens celulares. Este trabalho teve como objetivo caracterizar estas linhagens celulares através do perfil de marcadores expressos na superfície celular identificados através de citometria de fluxo. Foi utilizado um painel de anticorpos dirigidos contra as proteínas de superfície CD19, CD21/CD35, CD22.2, CD23, CD25, CD30, CD38, CD40, CD45/B220, CD69, CD72, CD79b, CD80, CD117, CD138, CD154 e CD184. As análises dos padrões de tamanho (FSC) e complexidade celular interna (SSC) revelaram a existência de uma população de menor tamanho (população 1) e outra de tamanho maior (população 2). As moléculas CD23, CD30, CD117 e CD154 não foram expressas em nenhuma das linhagens avaliadas. A linhagem P3X63Ag8.653 apresentou expressão em ambas subpopulações dos marcadores CD40, CD80, CD184 e CD138, enquanto que os marcadores CD45/B220 e CD25 foram expressos apenas na subpopulação 1. A linhagem SP2/0-Ag14 apresentou expressão em ambas as subpopulações dos marcadores CD40, CD80, CD72, CD22, CD79b, CD184 e CD138, enquanto que as moléculas CD45/B220 e CD25 foram expressos apenas na subpopulação 1. As linhagens SP2/0-Ag14 e P3X63Ag8.653 apresentaram maior similaridade no perfil imunofenotípico entre si em comparação com a linhagem NS1. Os marcadores expressos em ambas as subpopulações de NS1 foram CD79b, CD80, CD138, CD184, CD38 e CD45/B220, enquanto que as moléculas expressas apenas na subpopulação 2 foram CD19, CD22, CD72 e CD69, sendo CD25 observado apenas na subpopulação 1. As mesmas análises foram realizadas nas linhagens de hibridomas 46C e 9C7. O perfil de expressão de marcadores celulares nas linhagens de hibridomas avaliados foi similar ao encontrado na linhagem celular P3X63Ag8.653 (da qual ambos são derivados), sendo a alta expressão de CD38 a diferença mais significativa. Os resultados obtidos no presente trabalho contribuem para aumentar o conhecimento sobre as linhagens celulares P3X63Ag8.653, SP2/0- Ag14 e NS1. A partir do estabelecimento de marcadores específicos para essas células abrem-se novas possibilidades de estudo de sua biologia, tanto no campo da ciência básica como na aplicada.