https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/214147 2026-10-17T13:16:22Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/276537 Canabinoides em óleos medicinais e extratos de Cannabis sativa L.: utilização de cromatografia líquida de ultra eficiência aplicada a estudos de estabilidade e teor de CBD e Δ9-THC Cobo, Diogo Faria A Cannabis sativa L. tem assumido relevância crescente no cenário terapêutico em virtude do potencial farmacológico de seus fitocanabinoides, especialmente o canabidiol (CBD) e o ??-tetraidrocanabinol (??-THC). No Brasil, o marco regulatório relacionado à Cannabis tem evoluído significativamente nos últimos anos com a publicação de diferentes resoluções da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa), incluindo a RDC nº 1.012/2026, que estabelece normas para o cultivo destinado à pesquisa científica; a RDC nº 1.013/2026, que regulamenta o cultivo e a produção de Cannabis para fins exclusivamente medicinais e farmacêuticos por pessoas jurídicas; a RDC nº 1.014/2026, que dispõe sobre o funcionamento de associações de pacientes sem fins lucrativos; e a RDC nº 1.015/2026, que atualiza o marco regulatório para fabricação e importação de produtos de Cannabis para uso medicinal no Brasil. Paralelamente a esse avanço regulatório, torna-se essencial assegurar a qualidade e a estabilidade físico-química de produtos à base de Cannabis. O presente estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método analítico por cromatografia líquida de ultra eficiência com detector de arranjo de diodos (UPLC-PDA) para a quantificação simultânea de cinco canabinoides conforme a RDC nº 166/2017, e aplicá-lo em estudo de estabilidade acelerada de extratos etanólicos e formulações oleosas. O método apresentou linearidade sisfatória (R2 > 0,999), precisão, exatidão, seletividade e robustez adequadas, demonstrando confiabilidade para o monitoramento da estabilidade. Os resultados evidenciaram degradação do ?9-THC, especialmente em extrato etanólico sob condição de 40°C, com formação concomitante de CBN, enquanto o CBD apresentou maior estabilidade relativa. A modelagem cinética indicou comportamento predominantemente de primeira ordem, permitindo a estimativa do t90. Para o ??-THC, estimou-se um t90 de aproximadamente 351 dias em extrato sob refrigeração (~6°C), 33 dias em temperatura ambiente (~20°C) e 3 dias a 40°C, enquanto em óleo os valores foram de 176, 117 e 19 dias, respectivamente. Para o CBD, estimaram-se 176, 151 e 132 dias em extrato sob as mesmas condições e 351, 351 e 11 dias em óleo respectivamente. Além da aplicação no estudo de estabilidade acelerada, o método desenvolvido foi aplicado na análise de aproximadamente 250 amostras reais de produtos à base de Cannabis, incluindo extratos etanólicos e formulações oleosas provenientes de associações de pacientes e produtores autorizados, demonstrando aplicabilidade prática, robustez e potencial para utilização em rotinas de controle de qualidade. Os resultados reforçam a influência determinante da matriz e da temperatura na estabilidade dos canabinoides e destacam a importância de métodos analíticos validados e da modelagem cinética para fundamentar a definição de prazos de validade e condições adequadas de armazenamento de produtos à base de Cannabis medicinal.; Abstract: Cannabis sativa L. has gained increasing relevance in the therapeutic field due to the pharmacological potential of its phytocannabinoids, especially cannabidiol (CBD) and ??-tetrahydrocannabinol (?9-THC). In Brazil, the regulatory framework related to Cannabis has evolved significantly in recent years with the publication of different resolutions by the Brazilian Health Regulatory Agency (Anvisa), including RDC No. 1,012/2026, which establishes standards for cultivation intended for scientific research; RDC No. 1,013/2026, which regulates the cultivation and production of Cannabis exclusively for medicinal and pharmaceutical purposes by legal entities; RDC No. 1,014/2026, which provides regulations for the operation of non-profit patient associations; and RDC No. 1,015/2026, which updates the regulatory framework for the manufacture and importation of Cannabis-based medicinal products in Brazil. Alongside these regulatory advances, ensuring the physicochemical quality and stability of Cannabis-based products has become essential. This study aimed to develop and validate an analytical method using ultra-performance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector (UPLC-PDA) for the simultaneous quantification of five cannabinoids according to RDC No. 166/2017, and to apply it to accelerated stability studies of ethanolic extracts and oil-based formulations. The method showed satisfactory linearity (R² > 0.999), precision, accuracy, selectivity, and robustness, demonstrating reliability for stability monitoring. The results showed degradation of ?9-THC, especially in ethanolic extracts under the 40°C condition, with concomitant formation of CBN, whereas CBD exhibited greater relative stability. Kinetic modeling indicated predominantly first-order behavior, allowing the estimation of t90. For ?9-THC, the estimated shelf life was approximately 351 days in refrigerated extract (~6°C), 33 days at room temperature (~20°C), and 3 days at 40°C, while in oil the values were 176, 117, and 19 days, respectively. For CBD, the estimated t90 values were 176, 151, and 132 days in extract under the same conditions, and 351, 351, and 11 days in oil, respectively. In addition to its application in accelerated stability studies, the developed method was applied to the analysis of approximately 250 real-world Cannabis-based product samples, including ethanolic extracts and oil formulations from patient associations and authorized producers, demonstrating practical applicability, robustness, and potential for use in routine quality control analyses. The results reinforce the determining influence of matrix composition and temperature on cannabinoid stability and highlight the importance of validated analytical methods and kinetic modeling to support the establishment of shelf-life periods and appropriate storage conditions for medicinal Cannabis-based products. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026. 2026-01-01T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/276423 Potencial imunomodulador do colostro humano avaliado in vitro em macrófagos murinos e integrado a análises transcriptômicas Alves, Elizabeth Soethe O colostro é considerado o alimento mais adequado às necessidades do recém nascido, por apresentar ampla variedade de proteínas e nutrientes essenciais nos primeiros dias de vida. Entre esses componentes, destacam-se as citocinas, associadas à modulação das respostas imunológicas. Neste estudo, avaliou-se, in vitro, o potencial imunomodulador do colostro humano em comparação a diferentes leites comerciais, por meio da resposta de macrófagos murinos e da integração com dados transcriptômicos disponíveis em bancos públicos. Para isso, macrófagos murinos da linhagem J774A.1 foram expostos a amostras de colostro humano, leite em pó, leite de vaca e fórmulas infantis, sendo a produção de nitrito utilizada como marcador funcional da resposta inflamatória celular. Também foram analisadas associações entre mediadores imunológicos e a produção de nitrito, além de perfis transcriptômicos de leite materno humano ao longo da lactação, de macrófagos murinos em condição basal e de sangue de cordão umbilical. Os resultados mostraram predomínio de IFN-? em relação à IL-10 nas amostras de colostro, sem influência significativa dos fatores maternos avaliados. Observou-se aumento significativo da produção de nitrito apenas nos macrófagos expostos às fórmulas infantis, enquanto o colostro não induziu aumento significativo desse marcador. Além disso, foi observada correlação negativa entre a produção de nitrito e os níveis de IFN- ?. As análises transcriptômicas indicaram maior expressão de genes relacionados à resposta imune no colostro e no leite de transição, com redução ao longo da lactação. Nos macrófagos, observou-se expressão constitutiva de genes associados à via TLR4/NF-?B, enquanto o sangue de cordão umbilical apresentou perfil de expressão gênica baixo a moderado para marcadores inflamatórios. Conjuntamente, os resultados sugerem que o colostro apresenta perfil imunológico ativo e pode contribuir para a modulação da resposta imune neonatal, especialmente nas fases iniciais da lactação.; Abstract: Colostrum is considered the most suitable food for meeting the nutritional needs of newborns, as it contains a wide variety of proteins and essential nutrients during the first days of life. Among these components, cytokines stand out due to their association with the modulation of immune responses. In this study, the immunomodulatory potential of human colostrum was evaluated in vitro in comparison with different commercial milk products through the response of murine macrophages and the integration of transcriptomic data available in public databases. For this purpose, murine macrophages of the J774A.1 lineage were exposed to samples of human colostrum, powdered milk, cow?s milk, and infant formulas, and nitrite production was used as a functional marker of the cellular inflammatory response. Associations between immunological mediators and nitrite production were also analyzed, in addition to transcriptomic profiles of human milk throughout lactation, murine macrophages under basal conditions, and umbilical cord blood. The results showed a predominance of IFN-? in relation to IL-10 in colostrum samples, without significant influence of the maternal factors evaluated. A significant increase in nitrite production was observed only in macrophages exposed to infant formulas, whereas colostrum did not induce a significant increase in this marker. In addition, a negative correlation was observed between nitrite production and IFN-? levels. Transcriptomic analyses indicated higher expression of genes related to immune response in colostrum and transitional milk, with a reduction throughout lactation. In macrophages, constitutive expression of genes associated with the TLR4/NF-?B pathway was observed, whereas umbilical cord blood presented a low to moderate gene expression profile for inflammatory markers. Taken together, the results suggest that colostrum presents an active immunological profile and may contribute to the modulation of the neonatal immune response, especially during the early stages of lactation. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026. 2026-01-01T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/275817 Prospecção e caracterização biológica de Bacillus em cama de aviário: potencial biotecnológico para aplicações em saúde única Wolleck, Victor Felipe A resistência aos antimicrobianos representa uma grave ameaça à saúde global, sendo necessário a descoberta de fontes alternativas de compostos antimicrobianos. O presente estudo teve como objetivo prospectar e caracterizar bactérias do gênero Bacillus provenientes de cama de aviário, avaliando seu potencial biotecnológico para aplicações no contexto da Saúde Única. Foram analisadas dez amostras, das quais se isolaram 94 cepas bacterianas por meio de estratégias baseadas em cultura em meios sólidos (TSA, TSA alcalino e Gly-IM). A identificação das espécies foi realizada por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e sequenciamento do gene 16S, revelando a predominância de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis. Os isolados foram fenotipicamente caracterizados quanto à atividade antagônica contra patógenos de interesse clínico e veterinário, tolerância a gradientes de pH e salinidade, perfil hemolítico e presença do gene aiiA da lactonase. Adicionalmente, três cepas selecionadas foram submetidas ao sequenciamento genômico total e à análise bioinformática para predição de clusters de genes biossintéticos (BGCs). Os resultados demonstraram atividade antagonista significativa, principalmente contra Staphylococcus aureus (incluindo MRSA) e sorovares de Salmonella. A maioria dos isolados exibiu elevada tolerância a pH alcalino (até 12) e altas concentrações de NaCl (até 15%), atributos compatíveis com o ambiente de origem. Dois isolados apresentaram o gene aiiA. A análise genômica confirmou a presença de diversos BGCs associados à síntese de metabólitos secundários conhecidos, como surfactina, fengicina, bacilaeno e mersacidina, corroborando o potencial antimicrobiano observado. Conclui-se que a cama de aviário constitui um nicho relevante para a prospecção de cepas de Bacillus com notável robustez ambiental e capacidade de produzir compostos bioativos, destacando seu potencial como agentes de biocontrole ou fontes de novos antimicrobianos, alinhando-se assim aos princípios da Saúde Única.; Abstract: Antimicrobial resistance represents a serious threat to global health, necessitating the discovery of alternative sources of antimicrobial compounds. The present study aimed to prospect and characterize bacteria of the genus Bacillus from poultry litter, evaluating their biotechnological potential for applications in the context of One Health. Ten samples were analyzed, from which 94 bacterial strains were isolated using culture-based strategies on solid media (TSA, alkaline TSA, and Gly-IM). Species identification was performed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and 16S gene sequencing, revealing a predominance of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis. The isolates were phenotypically characterized for antagonistic activity against clinical and veterinary pathogens, tolerance to pH and salinity gradients, hemolytic profile, and presence of the lactonase aiiA gene. Additionally, three selected strains were subjected to whole-genome sequencing and bioinformatic analysis for the prediction of biosynthetic gene clusters (BGCs). The results demonstrated significant antagonistic activity, primarily against Staphylococcus aureus (including MRSA) and Salmonella serovars. Most isolates exhibited high tolerance to alkaline pH (up to 12) and high NaCl concentrations (up to 15%), attributes compatible with the source environment. Two isolates carried the aiiA gene. Genomic analysis confirmed the presence of various BGCs associated with the synthesis of known secondary metabolites, such as surfactina, fengicina, bacilaeno, and mersacidina, corroborating the observed antimicrobial potential. In conclusion, poultry litter constitutes a relevant niche for prospecting Bacillus strains with notable environmental robustness and the capacity to produce bioactive compounds, highlighting their potential as biocontrol agents or sources of new antimicrobials, thereby aligning with One Health principles. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026. 2026-01-01T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/275635 Fatores de risco e mortalidade entre diferentes abordagens terapêuticas em pacientes com infecções por microrganismos produtores de metalo-ß-lactamase Battisti, Kharol Neves A Organização Mundial da Saúde (OMS) atualizou, em 2024, a lista de patógenos prioritários globais, destacando Enterobacterales resistentes aos carbapenêmicos como uma ameaça crescente à saúde pública. Esses microrganismos apresentam elevada resistência aos antimicrobianos (RAM), dificultando o tratamento e agravando os desfechos clínicos. A resistência aos carbapenêmicos é frequentemente atribuída à produção de metalo-ß-lactamases (MBLs), enzimas capazes de inativar uma ampla gama de antimicrobianos ß-lactâmicos. Com poucas alternativas terapêuticas eficazes, o tratamento é atribuído à experiência clínica. São poucos dados no que diz respeito à caracterização clínica de infecções por microrganismos produtores de MBL no Brasil, bem como o desfecho clínico das alternativas terapêuticas disponíveis no país. Esse fato se torna mais preocupante diante do cenário nacional em que as taxas de RAM estão em ascensão. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar os desfechos terapêuticos de pacientes com infecções por microrganismos produtores de MBL e identificar fatores de risco associados, de acordo com o braço do esquema terapêutico escolhido: (1) esquema combinado com ceftazidima-avibactam associada à aztreonam (CZA-AZT); (2) esquema combinado com polimixina B; e (3) esquema com outras alternativas antimicrobianas. Trata-se de um estudo realizado em um hospital de alta complexidade no sul do Brasil, no período de julho de 2024 a julho de 2025. Dos 160 casos com isolamento de microrganismos produtores de MBL, 31 pacientes foram incluídos, sendo 96,8% com NDM (New Delhi Metalo-ß-lactamase) e 3,2% com VIM (Verona Integron Metalo-ß-lactamase). Sete pacientes (22,6%) compuseram o braço 1, nove (29%) o braço 2 e quinze (48,4%) o braço 3. As infecções mais frequentes foram de foco urinário (29%), seguidas por pele e partes moles (25,8%) e foco pulmonar (16,1%). O início da terapia antimicrobiana apropriada em até 48 horas ocorreu em 74,2% dos casos. A taxa de mortalidade em 30 dias foi de 22,6%. Observou-se maior risco de mortalidade associado à internação em unidade de terapia intensiva (UTI) (p=0,012) e ao prolongamento da permanência nesse setor (p=0,086). O uso de polimixina B esteve associado a maior risco de mortalidade (p=0,001) e a maior ocorrência de eventos adversos. Em contraste, os esquemas terapêuticos incluídos no braço 3 apresentaram associação com redução da mortalidade (p=0,007). Esses achados evidenciam a influência da gravidade clínica, da escolha do esquema terapêutico e da rapidez no diagnóstico microbiológico sobre os desfechos clínicos, reforçando a importância dos Programas de Stewardship de Antimicrobianos e de medidas rigorosas de controle de infecção, em consonância com as recomendações nacionais e internacionais vigentes.; Abstract: In 2024, the World Health Organization (WHO) updated its list of priority global pathogens, highlighting carbapenem-resistant Enterobacterales as a growing threat to public health. These microorganisms have shown high resistance to antimicrobials, making treatment difficult and worsening clinical stages. Carbapenem resistance is often attributed to the production of metallo-ß-lactamases (MBLs), enzymes capable of inactivating a wide range of ß-lactam antimicrobials. With few therapeutic alternatives, treatment is left to clinical experience. There is little data regarding the clinical characterization of infections caused by MBL-producing microorganisms in Brazil, as well as the clinical outcome of the therapeutic alternatives available in the country. This fact becomes more concerning given the national scenario where antimicrobial resistance rates are on the rise. Thus, the objective of this study was to evaluate the therapeutic outcomes of patients with infections caused by MBL-producing microorganisms and to identify associated risk factors, according to the chosen therapeutic regimen arm: (1) combination regimen with ceftazidime-avibactam associated with aztreonam (CZA-AZT); (2) combination regimen with polymyxin B; and (3) regimen with other antimicrobial alternatives. This study was conducted in a high-complexity hospital in southern Brazil, from July 2024 to July 2025. Of the 160 cases with isolation of MBL-producing microorganisms, 31 patients were included, with 96.8% having NDM (New Delhi Metalo-ß-lactamase) and 3.2% having VIM (Verona Integron Metalo-ß-lactamase). Seven patients (22.6%) comprised arm 1, nine (29%) arm 2, and fifteen (48.4%) arm 3. The most frequent infections were urinary tract infections (29%), followed by skin and soft tissue infections (25.8%) and pulmonary infections (16.1%). Initiation of appropriate antimicrobial therapy within 48 hours occurred in 74.2% of cases. The 30-day mortality rate was 22.6%. A higher risk of mortality was associated with admission to the intensive care unit (ICU) (p=0.012) and prolonged stay in that unit (p=0.086). The use of polymyxin B was associated with a higher risk of mortality (p=0.001) and a higher occurrence of adverse events. In contrast, the therapeutic regimens included in arm 3 were associated with a reduction in mortality (p=0.007). These findings highlight the influence of clinical severity, choice of therapeutic regimen, and speed of microbiological diagnosis on clinical outcomes, reinforcing the importance of Antimicrobial Stewardship Programs and rigorous infection control measures, in line with current national and international recommendations. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026. 2026-01-01T00:00:00Z