https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/214147 2026-11-08T18:50:25Z 2026-11-08T18:50:25Z Machado, Vinicius dos Santos https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/277170 2026-10-20T23:32:17Z 2026-01-01T00:00:00Z

Avaliação in silico de compostos antitripanossomatídeos via docking e dinâmica molecular Machado, Vinicius dos Santos As doenças tropicais negligenciadas, como a Doença de Chagas e as Leishmanioses, causadas por parasitas tripanossomatídeos (Trypanosoma cruzi e espécies de Leishmania), representam um grave problema de saúde pública, evidenciando a necessidade do desenvolvimento de novas alternativas terapêuticas. Neste contexto, a enzima tripanotiona redutase (TR) destaca-se como um alvo farmacológico altamente promissor, dado o seu papel essencial na manutenção do equilíbrio redox nestes parasitas. O presente trabalho teve como objetivo avaliar in silico, através de técnicas de docking e dinâmica molecular (DM), uma série de compostos derivados dos protótipos S21 e S33, com vista a elucidar os seus mecanismos de inibição frente à TR e correlacionar estes achados com os dados de atividade biológica in vitro previamente estabelecidos. O docking molecular revelou que a atividade inibitória dos compostos ativos (como os derivados 107, 118 e 119) está associada ao estabelecimento de interações chave com resíduos Tyr111, His461 do sítio ativo e a dupla catalítica Cys53 e Cys58. Por outro lado, compostos inativos apresentaram um ancoramento superficial ou afastado do sítio catalítico. As simulações de dinâmica molecular (300 ns) corroboraram estas predições. O composto 107 evidenciou rigidez conformacional e forte retenção no alvo. O ligante 97 (inativo in vitro) demonstrou estabilidade posicional sem interação catalítica, sugerindo que a sua ineficácia biológica pode estar ligada a barreiras farmacocinéticas ou de permeabilidade celular induzidas pelo radical terc-butanol. A análise de flutuação residual (RMSF) demonstrou ainda que a rigidez estrutural da região interfacial da cadeia B (resíduos 398-409) interfere na estabilização dos complexos. Em suma, as ferramentas computacionais aplicadas permitiram racionalizar os resultados biológicos, trazendo novos conhecimentos estruturais e termodinâmicos, essenciais para o planejamento e otimização de novos e mais eficazes fármacos antitripanossomatídeos.; Abstract: Neglected tropical diseases, such as Chagas disease and leishmaniasis, caused by trypanosomatid parasites (Trypanosoma cruzi and Leishmania species), represent a serious public health problem, highlighting the need for the development of new therapeutic alternatives. In this context, the enzyme trypanothione reductase (TR) stands out as a highly promising pharmacological target, given its essential role in maintaining redox balance in these parasites. This work aimed to evaluate in silico, using docking and molecular dynamics (MD) techniques, a series of compounds derived from the S21 and S33 prototypes, in order to elucidate their inhibition mechanisms against TR and correlate these findings with previously established in vitro biological activity data. Molecular docking revealed that the inhibitory activity of the active compounds (such as derivatives 107, 118, and 119) is associated with the establishment of key interactions with residues Tyr111 and His461 of the active site and the catalytic duct Cys53 and Cys58. On the other hand, inactive compounds showed superficial or distant anchoring from the catalytic site. Molecular dynamics simulations (300 ns) corroborated these predictions. Compound 107 showed conformational rigidity and strong retention at the target. Ligand 97 (inactive in vitro) demonstrated positional stability without catalytic interaction, suggesting that its biological ineffectiveness may be linked to pharmacokinetic or cell permeability barriers induced by the tert-butanol radical. Residual fluctuation analysis (RMSF) further demonstrated that the structural rigidity of the interfacial region of chain B (residues 398-409) interferes with the stabilization of the complexes. In summary, the applied computational tools made it possible to rationalize biological results, bringing new structural and thermodynamic knowledge, essential for the planning and optimization of new and more effective antitrypanosomatid drugs. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026.

2026-01-01T00:00:00Z Cobo, Diogo Faria https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/276537 2026-09-16T17:04:12Z 2026-01-01T00:00:00Z

Canabinoides em óleos medicinais e extratos de Cannabis sativa L.: utilização de cromatografia líquida de ultra eficiência aplicada a estudos de estabilidade e teor de CBD e Δ9-THC Cobo, Diogo Faria A Cannabis sativa L. tem assumido relevância crescente no cenário terapêutico em virtude do potencial farmacológico de seus fitocanabinoides, especialmente o canabidiol (CBD) e o ??-tetraidrocanabinol (??-THC). No Brasil, o marco regulatório relacionado à Cannabis tem evoluído significativamente nos últimos anos com a publicação de diferentes resoluções da Agência Nacional de Vigilância Sanitária (Anvisa), incluindo a RDC nº 1.012/2026, que estabelece normas para o cultivo destinado à pesquisa científica; a RDC nº 1.013/2026, que regulamenta o cultivo e a produção de Cannabis para fins exclusivamente medicinais e farmacêuticos por pessoas jurídicas; a RDC nº 1.014/2026, que dispõe sobre o funcionamento de associações de pacientes sem fins lucrativos; e a RDC nº 1.015/2026, que atualiza o marco regulatório para fabricação e importação de produtos de Cannabis para uso medicinal no Brasil. Paralelamente a esse avanço regulatório, torna-se essencial assegurar a qualidade e a estabilidade físico-química de produtos à base de Cannabis. O presente estudo teve como objetivo desenvolver e validar um método analítico por cromatografia líquida de ultra eficiência com detector de arranjo de diodos (UPLC-PDA) para a quantificação simultânea de cinco canabinoides conforme a RDC nº 166/2017, e aplicá-lo em estudo de estabilidade acelerada de extratos etanólicos e formulações oleosas. O método apresentou linearidade sisfatória (R2 > 0,999), precisão, exatidão, seletividade e robustez adequadas, demonstrando confiabilidade para o monitoramento da estabilidade. Os resultados evidenciaram degradação do ?9-THC, especialmente em extrato etanólico sob condição de 40°C, com formação concomitante de CBN, enquanto o CBD apresentou maior estabilidade relativa. A modelagem cinética indicou comportamento predominantemente de primeira ordem, permitindo a estimativa do t90. Para o ??-THC, estimou-se um t90 de aproximadamente 351 dias em extrato sob refrigeração (~6°C), 33 dias em temperatura ambiente (~20°C) e 3 dias a 40°C, enquanto em óleo os valores foram de 176, 117 e 19 dias, respectivamente. Para o CBD, estimaram-se 176, 151 e 132 dias em extrato sob as mesmas condições e 351, 351 e 11 dias em óleo respectivamente. Além da aplicação no estudo de estabilidade acelerada, o método desenvolvido foi aplicado na análise de aproximadamente 250 amostras reais de produtos à base de Cannabis, incluindo extratos etanólicos e formulações oleosas provenientes de associações de pacientes e produtores autorizados, demonstrando aplicabilidade prática, robustez e potencial para utilização em rotinas de controle de qualidade. Os resultados reforçam a influência determinante da matriz e da temperatura na estabilidade dos canabinoides e destacam a importância de métodos analíticos validados e da modelagem cinética para fundamentar a definição de prazos de validade e condições adequadas de armazenamento de produtos à base de Cannabis medicinal.; Abstract: Cannabis sativa L. has gained increasing relevance in the therapeutic field due to the pharmacological potential of its phytocannabinoids, especially cannabidiol (CBD) and ??-tetrahydrocannabinol (?9-THC). In Brazil, the regulatory framework related to Cannabis has evolved significantly in recent years with the publication of different resolutions by the Brazilian Health Regulatory Agency (Anvisa), including RDC No. 1,012/2026, which establishes standards for cultivation intended for scientific research; RDC No. 1,013/2026, which regulates the cultivation and production of Cannabis exclusively for medicinal and pharmaceutical purposes by legal entities; RDC No. 1,014/2026, which provides regulations for the operation of non-profit patient associations; and RDC No. 1,015/2026, which updates the regulatory framework for the manufacture and importation of Cannabis-based medicinal products in Brazil. Alongside these regulatory advances, ensuring the physicochemical quality and stability of Cannabis-based products has become essential. This study aimed to develop and validate an analytical method using ultra-performance liquid chromatography coupled with a photodiode array detector (UPLC-PDA) for the simultaneous quantification of five cannabinoids according to RDC No. 166/2017, and to apply it to accelerated stability studies of ethanolic extracts and oil-based formulations. The method showed satisfactory linearity (R² > 0.999), precision, accuracy, selectivity, and robustness, demonstrating reliability for stability monitoring. The results showed degradation of ?9-THC, especially in ethanolic extracts under the 40°C condition, with concomitant formation of CBN, whereas CBD exhibited greater relative stability. Kinetic modeling indicated predominantly first-order behavior, allowing the estimation of t90. For ?9-THC, the estimated shelf life was approximately 351 days in refrigerated extract (~6°C), 33 days at room temperature (~20°C), and 3 days at 40°C, while in oil the values were 176, 117, and 19 days, respectively. For CBD, the estimated t90 values were 176, 151, and 132 days in extract under the same conditions, and 351, 351, and 11 days in oil, respectively. In addition to its application in accelerated stability studies, the developed method was applied to the analysis of approximately 250 real-world Cannabis-based product samples, including ethanolic extracts and oil formulations from patient associations and authorized producers, demonstrating practical applicability, robustness, and potential for use in routine quality control analyses. The results reinforce the determining influence of matrix composition and temperature on cannabinoid stability and highlight the importance of validated analytical methods and kinetic modeling to support the establishment of shelf-life periods and appropriate storage conditions for medicinal Cannabis-based products. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026.

2026-01-01T00:00:00Z Alves, Elizabeth Soethe https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/276423 2026-09-14T23:29:35Z 2026-01-01T00:00:00Z

Potencial imunomodulador do colostro humano avaliado in vitro em macrófagos murinos e integrado a análises transcriptômicas Alves, Elizabeth Soethe O colostro é considerado o alimento mais adequado às necessidades do recém nascido, por apresentar ampla variedade de proteínas e nutrientes essenciais nos primeiros dias de vida. Entre esses componentes, destacam-se as citocinas, associadas à modulação das respostas imunológicas. Neste estudo, avaliou-se, in vitro, o potencial imunomodulador do colostro humano em comparação a diferentes leites comerciais, por meio da resposta de macrófagos murinos e da integração com dados transcriptômicos disponíveis em bancos públicos. Para isso, macrófagos murinos da linhagem J774A.1 foram expostos a amostras de colostro humano, leite em pó, leite de vaca e fórmulas infantis, sendo a produção de nitrito utilizada como marcador funcional da resposta inflamatória celular. Também foram analisadas associações entre mediadores imunológicos e a produção de nitrito, além de perfis transcriptômicos de leite materno humano ao longo da lactação, de macrófagos murinos em condição basal e de sangue de cordão umbilical. Os resultados mostraram predomínio de IFN-? em relação à IL-10 nas amostras de colostro, sem influência significativa dos fatores maternos avaliados. Observou-se aumento significativo da produção de nitrito apenas nos macrófagos expostos às fórmulas infantis, enquanto o colostro não induziu aumento significativo desse marcador. Além disso, foi observada correlação negativa entre a produção de nitrito e os níveis de IFN- ?. As análises transcriptômicas indicaram maior expressão de genes relacionados à resposta imune no colostro e no leite de transição, com redução ao longo da lactação. Nos macrófagos, observou-se expressão constitutiva de genes associados à via TLR4/NF-?B, enquanto o sangue de cordão umbilical apresentou perfil de expressão gênica baixo a moderado para marcadores inflamatórios. Conjuntamente, os resultados sugerem que o colostro apresenta perfil imunológico ativo e pode contribuir para a modulação da resposta imune neonatal, especialmente nas fases iniciais da lactação.; Abstract: Colostrum is considered the most suitable food for meeting the nutritional needs of newborns, as it contains a wide variety of proteins and essential nutrients during the first days of life. Among these components, cytokines stand out due to their association with the modulation of immune responses. In this study, the immunomodulatory potential of human colostrum was evaluated in vitro in comparison with different commercial milk products through the response of murine macrophages and the integration of transcriptomic data available in public databases. For this purpose, murine macrophages of the J774A.1 lineage were exposed to samples of human colostrum, powdered milk, cow?s milk, and infant formulas, and nitrite production was used as a functional marker of the cellular inflammatory response. Associations between immunological mediators and nitrite production were also analyzed, in addition to transcriptomic profiles of human milk throughout lactation, murine macrophages under basal conditions, and umbilical cord blood. The results showed a predominance of IFN-? in relation to IL-10 in colostrum samples, without significant influence of the maternal factors evaluated. A significant increase in nitrite production was observed only in macrophages exposed to infant formulas, whereas colostrum did not induce a significant increase in this marker. In addition, a negative correlation was observed between nitrite production and IFN-? levels. Transcriptomic analyses indicated higher expression of genes related to immune response in colostrum and transitional milk, with a reduction throughout lactation. In macrophages, constitutive expression of genes associated with the TLR4/NF-?B pathway was observed, whereas umbilical cord blood presented a low to moderate gene expression profile for inflammatory markers. Taken together, the results suggest that colostrum presents an active immunological profile and may contribute to the modulation of the neonatal immune response, especially during the early stages of lactation. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026.

2026-01-01T00:00:00Z Wolleck, Victor Felipe https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/275817 2026-09-10T23:28:10Z 2026-01-01T00:00:00Z

Prospecção e caracterização biológica de Bacillus em cama de aviário: potencial biotecnológico para aplicações em saúde única Wolleck, Victor Felipe A resistência aos antimicrobianos representa uma grave ameaça à saúde global, sendo necessário a descoberta de fontes alternativas de compostos antimicrobianos. O presente estudo teve como objetivo prospectar e caracterizar bactérias do gênero Bacillus provenientes de cama de aviário, avaliando seu potencial biotecnológico para aplicações no contexto da Saúde Única. Foram analisadas dez amostras, das quais se isolaram 94 cepas bacterianas por meio de estratégias baseadas em cultura em meios sólidos (TSA, TSA alcalino e Gly-IM). A identificação das espécies foi realizada por espectrometria de massas (MALDI-TOF) e sequenciamento do gene 16S, revelando a predominância de Bacillus subtilis e Bacillus licheniformis. Os isolados foram fenotipicamente caracterizados quanto à atividade antagônica contra patógenos de interesse clínico e veterinário, tolerância a gradientes de pH e salinidade, perfil hemolítico e presença do gene aiiA da lactonase. Adicionalmente, três cepas selecionadas foram submetidas ao sequenciamento genômico total e à análise bioinformática para predição de clusters de genes biossintéticos (BGCs). Os resultados demonstraram atividade antagonista significativa, principalmente contra Staphylococcus aureus (incluindo MRSA) e sorovares de Salmonella. A maioria dos isolados exibiu elevada tolerância a pH alcalino (até 12) e altas concentrações de NaCl (até 15%), atributos compatíveis com o ambiente de origem. Dois isolados apresentaram o gene aiiA. A análise genômica confirmou a presença de diversos BGCs associados à síntese de metabólitos secundários conhecidos, como surfactina, fengicina, bacilaeno e mersacidina, corroborando o potencial antimicrobiano observado. Conclui-se que a cama de aviário constitui um nicho relevante para a prospecção de cepas de Bacillus com notável robustez ambiental e capacidade de produzir compostos bioativos, destacando seu potencial como agentes de biocontrole ou fontes de novos antimicrobianos, alinhando-se assim aos princípios da Saúde Única.; Abstract: Antimicrobial resistance represents a serious threat to global health, necessitating the discovery of alternative sources of antimicrobial compounds. The present study aimed to prospect and characterize bacteria of the genus Bacillus from poultry litter, evaluating their biotechnological potential for applications in the context of One Health. Ten samples were analyzed, from which 94 bacterial strains were isolated using culture-based strategies on solid media (TSA, alkaline TSA, and Gly-IM). Species identification was performed by mass spectrometry (MALDI-TOF) and 16S gene sequencing, revealing a predominance of Bacillus subtilis and Bacillus licheniformis. The isolates were phenotypically characterized for antagonistic activity against clinical and veterinary pathogens, tolerance to pH and salinity gradients, hemolytic profile, and presence of the lactonase aiiA gene. Additionally, three selected strains were subjected to whole-genome sequencing and bioinformatic analysis for the prediction of biosynthetic gene clusters (BGCs). The results demonstrated significant antagonistic activity, primarily against Staphylococcus aureus (including MRSA) and Salmonella serovars. Most isolates exhibited high tolerance to alkaline pH (up to 12) and high NaCl concentrations (up to 15%), attributes compatible with the source environment. Two isolates carried the aiiA gene. Genomic analysis confirmed the presence of various BGCs associated with the synthesis of known secondary metabolites, such as surfactina, fengicina, bacilaeno, and mersacidina, corroborating the observed antimicrobial potential. In conclusion, poultry litter constitutes a relevant niche for prospecting Bacillus strains with notable environmental robustness and the capacity to produce bioactive compounds, highlighting their potential as biocontrol agents or sources of new antimicrobials, thereby aligning with One Health principles. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Farmácia, Florianópolis, 2026.

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