Triagem sorológica exploratória para o sistema Lan e análise das mutações mais prevalentes do gene ABCB6 nos doadores de sangue do Centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina

Abstract

De acordo com a Sociedade Internacional de Transfusão Sanguínea (ISBT), o antígeno Lan (ISBT 001033), pertencente ao sistema de grupo sanguíneo Lan (ISBT 033), é um antígeno eritrocitário de alta prevalência codificado pelo gene ABCB6. O fenótipo Lan negativo é extremamente raro, mas pode levar à formação de aloanticorpos anti-Lan clinicamente significativos. Dados sobre a distribuição desse fenótipo no Brasil ainda são limitados. Foi realizado um estudo transversal com 8.600 doadores de sangue selecionados aleatoriamente na hemorrede do Centro de Hematologia e Hemoterapia de Santa Catarina (HEMOSC). A triagem sorológica para o antígeno Lan foi realizada por teste de antiglobulina indireta em gel (LISS/Coombs), utilizando anticorpo monoclonal anti-Lan (OSK43). Amostras com reatividade reduzida foram submetidas a testes confirmatórios, incluindo adsorção e eluição, citometria de fluxo e análise molecular do gene ABCB6. Estudos familiares foram conduzidos quando aplicável. Após exclusões, 8.441 amostras foram analisadas. Cinco doadores apresentaram reatividade persistente <3+ após confirmação, correspondendo inicialmente a quatro indivíduos Lan positivo fraco (0,047%) e um classificado como Lan negativo (0,012%). No entanto, análises sorológicas complementares, citometria de fluxo e investigação molecular demonstraram expressão antigênica residual na amostra previamente classificada como Lan negativa, resultando em sua reclassificação como Lan positivo fraco. Dessa forma, a frequência final de indivíduos Lan negativo foi de 0/8.441 (0%), enquanto os fenótipos Lan positivo fraco totalizaram 5/8.441 (?0,059%). Entre essas amostras, foram identificadas seis variantes no gene ABCB6, incluindo mutações sinônimas, missense e nonsense, sendo duas novel, incluindo uma com potencial efeito nulo. Este estudo demonstra a viabilidade de uma estratégia de triagem sorológica de baixo custo para a identificação e caracterização de fenótipos raros do sistema Lan em uma grande população de doadores. A identificação de variantes no gene ABCB6, incluindo alterações novel, evidencia a heterogeneidade genética associada à expressão do antígeno Lan e reforça a importância da integração entre abordagens sorológicas e moleculares. Além disso, os achados destacam o papel de estratégias sistemáticas de triagem na detecção de fenótipos raros e na identificação de doadores com potencial relevância transfusional, contribuindo para o fortalecimento do Cadastro Nacional de Sangue Raro e para a segurança transfusional em populações miscigenadas.

Abstract: According to the International Society of Blood Transfusion (ISBT), the Lan antigen (ISBT 001033), belonging to the LAN blood group system (ISBT 033), is a high-prevalence red blood cell antigen encoded by the ABCB6 gene. The Lan-negative phenotype is extremely rare but may lead to the development of clinically significant anti-Lan alloantibodies. Data regarding the distribution of this phenotype in Brazil remain limited. A cross-sectional study was conducted including 8,600 randomly selected blood donors from the blood center network of the Santa Catarina Hematology and Hemotherapy Center (HEMOSC), Southern Brazil. Serologic screening for Lan antigen expression was performed using indirect antiglobulin gel testing (LISS/Coombs) with the monoclonal anti-Lan reagent OSK43. Samples showing reduced reactivity underwent confirmatory testing, including adsorption and elution assays, flow cytometry, and molecular analysis of the ABCB6 gene. Family studies were performed when applicable. After exclusions, 8,441 samples were analyzed. Five donors showed persistent reactivity <3+ upon confirmatory testing, initially corresponding to four Lan weak-positive individuals (0.047%) and one donor classified as Lan negative (0.012%). However, complementary serologic analyses, flow cytometry, and molecular investigation demonstrated residual antigen expression in the sample previously classified as Lan-negative, leading to its reclassification as Lan weak-positive. Therefore, the final frequency of true Lan- negative individuals was 0/8,441 (0%), whereas Lan weak-positive phenotypes totaled 5/8,441 (?0.059%). Among these samples, six ABCB6 variants were identified, including synonymous, missense, and nonsense mutations, two of which were novel, including one with a potential null effect. This study demonstrates the feasibility of a low-cost serologic screening strategy for the identification and characterization of rare Lan phenotypes in a large donor population. The identification of ABCB6 variants, including novel alterations, highlights the genetic heterogeneity underlying Lan antigen expression and reinforces the importance of integrating serologic and molecular approaches. Furthermore, these findings emphasize the role of systematic screening strategies in the detection of rare phenotypes and in the identification of donors with potential transfusion relevance, contributing to the strengthening of the Brazilian Rare Blood Donor Registry and to transfusion safety in admixed populations.