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A Doença de Parkinson (DP) é uma doença degenerativa cujas alterações motoras decorrem principalmente da morte de neurônios dopaminérgicos, manifestando-se com tremor de repouso, bradicinesia, rigidez com roda dentada e anormalidades posturais. Atualmente, os medicamentos utilizados para tratar a DP são sintomáticos, ou seja, repõem parcialmente a dopamina que está faltando, mas não evitam o progresso da doença. Uma das abordagens inovadoras que tem sido estudada para o tratamento da DP consiste na terapia com microRNAs (miRNAs). No entanto, tais moléculas são rapidamente degradadas nos fluidos biológicos pela ação das endonucleases. Além disso, são moléculas grandes em tamanho e carregadas negativamente, o que impede a sua entrada nas células. Para contornar estas limitações, nanopartículas lipídicas (NPLs) têm sido investigadas como carreadores para miRNAs. Na composição destas NPLs, o lipídio catiônico ionizável é responsável, em grande parte, pela internalização celular. Em meio ácido apresenta carga positiva, o que favorece a complexação com o ácido nucleico, mas é neutro em pH fisiológico, permitindo a entrada das NPLs nas células por endocitose. Uma vez no endossoma, em pH mais baixo, torna-se protonado, liberando o ácido nucleico para o citosol. Assim, neste trabalho, NPLs brancas e contendo miRNAs de células precursoras neuronais foram preparadas pelo método de diluição em etanol . As formulações foram constituídas pelo lipídio catiônico (DOTAP) e/ou ionizável (DODMA), um lipídio estruturante (DSPC), um lipídio peguilado (DSPE-PEG2000) e colesterol. A relação molar de lipídio catiônico, DSPC, DSPE-PEG2000 e colesterol foi mantida em 50:10:1,5:38,5 e DOTAP ou uma mistura de DODMA:DOTAP 1:1 foi usada como lipídio catiônico. Três concentrações totais de lipídios foram testadas, 12,5, 25 e 50 mM. As NPLs foram caracterizadas quanto ao tamanho e potencial zeta por espalhamento dinâmico da luz e anemometria laser doppler, respectivamente. A morfologia das partículas foi avaliada por Cryo-TEM. Nanopartículas brancas com tamanho variando entre 70 e 90 nm, monodispersas e com carga superficial positiva próxima a neutralidade foram obtidas, sendo que aquelas preparadas unicamente com DOTAP exibiram menor tamanho. Resultados semelhantes foram obtidos para as NPLs contendo o miRNA. As análises de Cryo-TEM evidenciaram a presença de nanoestrutruras vesiculares constituídas por uma bicamada lipídica e núcleo interno aquoso para as NPLs brancas. A mesma estrutura vesicular foi observada para as NPLs contendo miRNA, mas com um núcleo eletrodenso, formado provavelmente pelo complexo com o lipídio catiônico. Com base nos dados obtidos através deste estudo, pode-se obter nanopartículas lipídicas brancas e contendo miRNA de células precursoras neuronais em sua composição para promover uma futura nova abordagem no tratamento da DP. |
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