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O carcinoma epidermoide de boca (CEB) permanece entre as lesões malignas com maior prevalência no Brasil e no mundo, representando mais de 90% das malignidades que acometem a cavidade oral. O desenvolvimento e progressão do CEB não deriva somente de alterações genéticas nas células do parênquima, mas também em modificações fenotípicas e metabólicas das células presentes no estroma, em especial, os fibroblastos. Estas células, quando associadas à lesão tumoral, podem apresentar características biológicas e fenotípicas que têm sido relacionadas a uma maior taxa de progressão e metástase da lesão. Além disso, fibroblastos também podem adquirir um fenótipo secretor associado a senescência, cujas características e perfil secretório de diversos fatores tanto intra como extracelulares tem sido apontado como mecanismos de promoção e disseminação de diversos tipos de cânceres. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi analisar os efeitos do meio condicionado proveniente de fibroblastos orais na viabilidade, proliferação e migração de células de CEB in vitro. Para isso, fibroblastos jovens foram cultivados até a confluência, em parte da cultura foi adicionado concentrações de peróxido de hidrogênio a 30% para indução da senescência. Após lavagem, meio DMEM sem soro foi adicionado a cultura e deixado por 24h para coleta dos meios condicionados. Foram considerados meios senescentes onde pelo menos 50% da cultura obtivesse marcação positiva para enzima β-galactosidase. Células de CEB (linhagem CAL27) foram cultivadas em placas de 96 e 48 cavidades e os meios condicionados experimentais de fibroblastos senescentes (MCFS), fibroblastos jovens (MCFJ) e meio DMEM sem soro (DSS) foram adicionados para compor os grupos de intervenção, onde o controle foi realizado com meio convencional suplementado com 10% de soro fetal bovino (DS). Para avaliação da viabilidade celular foi utilizado o método da coloração com Sulforrodamina B; para análise da migração celular o método do “Scratch” ou ranhura; e para confirmação da proliferação celular, utilizou-se a coloração fluorescente com CyQuant. Foi observado que os grupos MCFJ e MCFS apresentaram uma média de viabilidade celular superior no tempo de 24h quando comparado ao tempo de 48h (p<0,000). A migração celular no grupo DSS apresentou diferença estatística apenas entre os tempos 0h e 48h (p=0,002), assim como o grupo MCFJ (p=0,04), já o grupo com MCFS foi significativo nos tempos 24h (p=0,042) e 48h (p=0,018) quando comparados ao tempo 0h. Em relação a proliferação celular, houve diferença estatística entre o grupo controle quando comparado ao grupo com grupo DSS (p=0,027) e de MCFS (p=0,034). Dessa forma, apesar das limitações que protocolos in vitro apresentam, foi possível observar que os meios condicionados foram capazes de influenciar na viabilidade, migração e proliferação das células de carcinoma epidermoide de boca. |
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