Expressão heteróloga de proteína quimérica pan-tripanosomatídeos por Leishmania tarentolae: Avaliação de eficácia vacinal para Doença de Chagas

Abstract

A doença de Chagas causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e as leishmanioses causadas por diferentes espécies do gênero Leishmania acometem em conjunto cerca de 7-8 milhões de pessoas no mundo. A prevenção e o controle dessas doenças ainda são baseados primariamente no controle vetorial, sendo que os medicamentos disponíveis apresentam elevada toxicidade e baixa eficácia, não havendo vacinas disponíveis para uso em humanos. Neste estudo, buscamos dar continuidade ao desenvolvimento de uma estratégia vacinal baseada na apresentação de uma proteína quimérica formada por genes que codificam epítopos imunogênicos conservados presentes em diferentes tripanosomatídeos por uma espécie não patogênica (L. tarentolae). Testes preliminares em camundongos imunizados com a proteína purificada revelaram uma redução da parasitemia pelo T. cruzi e uma redução das lesões e cargas parasitárias nos animais infectados com L. amazonensis, L. mexicana e L. infantum. Utilizando um plasmídeo desenvolvido pelo nosso grupo (FlagGPI_pROCK Neo) para expressão da quimera em L. tarentolae, obtivemos parasitos transfectantes, tendo detectado a presença do plasmídeo nos parasitos através de PCR e a expressão da mNeonGreen, evidência indireta da expressão da proteína quimérica, entretanto, ensaios de Western blot utilizando um antissoro anti-quimera não confirmaram esta expressão. Objetivando maximizar a expressão, realizamos ajustes na sequência do plasmídeo Quimera_FlagGPI_pROCK Neo visando novos ensaios de transfecção.