Modificação Pós-traducional do Fator de Transcrição EL222

Abstract

Fatores de transcrição são proteínas envolvidas no processo de transcrição genética, sendo capazes de se ligar ao DNA de forma gene-específica. Essa propriedade despertou o interesse em possíveis aplicações farmacológicas dessa classe de proteínas, que com as modificações adequadas poderiam promover atividade antitumoral ou marcação de DNA, por exemplo. A proteína EL222 é um fator de transcrição que possui um domínio LOV e se liga ao DNA quando irradiada com luz azul. Uma modificação pós-traducional na única cisteína livre da EL222 permitiria a formação de uma nuclease artificial utilizando compostos de coordenação, permitindo assim um processo de clivagem de DNA. Nucleases são enzimas capazes de quebrar as ligações entre os nucleotídeos, suas contrapartes artificiais podendo ser baseadas em complexos metálicos, como compostos de coordenação com alta seletividade. O objetivo deste projeto de pesquisa é o desenvolvimento dessas nucleases artificiais com alta seletividade. A expressão de EL222 foi feita a partir do cultivo da bactéria E. Coli transformada com o vetor de expressão da proteína EL222, pHis-Gβ1-EL222, seguida pela purificação por cromatografia de afinidade metálica em coluna para obtenção da proteína em alto grau de pureza. A proteína foi inicialmente caracterizada por UV-Vis e Fluorometria, avaliando sua estabilidade térmica, e seu comportamento na presença de luz branca. Para testar a capacidade de modificação da proteína, reações modelo de conversão de cisteína a dehidroalanina foram inicialmente realizadas. Os resultados iniciais indicam a conversão desejada da cisteína, porém em baixo rendimento, fazendo com que otimizações da reação sejam necessárias.