A utilização de nanocarreadores na aceleração do processo de cicatrização de lesões cutâneas induzidas em camundongos

Abstract

A cicatrização de lesões é a capacidade de regeneração para que a pele possa continuar exercendo a função de proteção. Compostos de origem natural são comumente utilizados para tratar doenças e sintomas devido a sua eficácia e baixo custo. A nanomedicina é uma nova tecnologia que vem demonstrando uma melhora na entrega sustentada de fármacos melhorando diversos tratamentos. Neste sentido, a incorporação de produtos naturais em nanocarreadores vem se mostrando eficiente no tratamento de lesões cutâneas. Sendo assim, o presente estudo visa avaliar o efeito de compostos naturais utilizando nanocarreadores sobre o processo de cicatrização. Camundongos machos da linhagem Swiss, foram randomicamente divididos em 4 grupos (Controle sem nenhum tratamento, nanopartícula vazia e dois conjuntos com compostos naturais em nanopartículas, sendo fórmula completa contendo Ácido Hialurônico, Ácido Kójico, Retinol e T-Growth e a fórmula parcial contendo apenas Ácido Hialurônico, Ácido Kójico e Retinol). Foram realizadas lesões cutâneas de 1cm² no dorso do animal que receberam diariamente 50µl das formulações ou do veículo. A avaliação das lesões ocorreram no 3º, 7º, 10º, 12º e 14º dia de tratamento. A pele foi extraída nos dias 3 e 14 e parte utilizada para confecção de lâminas histológicas, coradas em Hematoxilina e Eosina e Tricrômico de Masson, para análise da epitelização, neovascularização e colágeno. A outra parte do tecido foi usada para análise bioquímica dos mediadores P38 e NFkb (envolvidos na proliferação celular), SIRT-1 (envolvido na sobrevida celular), PGC1 e TFAM (envolvidos na biogênese mitocondrial) pela técnica de Western Blotting. A análise estatística foi realizada utlizando a variância ANOVA two-way e o nível de significância utilizado foi de p<0,05. O estudo foi aprovado pelo Comitê de ética em uso de animais sob protocolo 1285201021. A avaliação do processo de cicatrização revelou que o grupo tratado com a fórmula completa apresentou uma aceleração na aproximação das bordas no 3º dia de tratamento da fase inflamatória do processo de cicatrização quando comparado ao grupo sem tratamento. Ainda, ao longo do tratamento, os resultados da fórmula completa se mantiveram elevados comparados a fórmula parcial (7 dia) e ao veículo (10 e 12 dia). Não houve diferença estatística nas análises de epitelização e neovascularização. A fórmula completa teve um aumento do NFkb e sustentou até a fase de remodelação, tendo também uma diminuição do TFAM na fase inflamatória. Nossos resultados demonstram que a fórmula completa foi capaz de reduzir o tempo de cicatrização, por meio da proliferação celular durante o processo. Por fim, os dados deste trabalho sugerem que o tratamento com compostos naturais por meio de nanocarreadores é benéfica na restauração da função de barreira da pele durante lesões cutâneas.

Abstract: Wound healing is the capability of regeneration that the body provides to heal the damage. Natural compounds are widely used to treat symptoms and diseases due the low cost and efficacy. Nanocarriers are a new technology to carry materials and improve drug delivery in recent medical treatments. Furthermore, natural compounds associated with nanomedicine can be an alternative to facilitate wound healing. Thus, the current study aims to evaluate the healing activity of natural compounds by using nanocarriers. Male Swiss mice were divided randomly in 4 groups (Control without any treatment; complete formula compound by Hialuronic acid, Kojic acid, Retinol and T-Growth; half formula compound by Hialuronic acid, Kojic acid and Retinol; and empty nanocarrier). Wound of 1cm² on the animal?s back received daily 50µl of the formula or vehicle. Wound healing evaluation occurred at the 3º, 7º, 10º, 12º and 14º days, using digital capture camera, and analysis was carried out using Image Pro Plus software. The skin was extracted for the confection of histological blades, colored in Hematoxylin and Eosin for the epithelialization and neovascularization analysis. The image analysis was done using the Image Pro Plus software. Biochemic analysis was using Western Blotting technique to measure biomarkers such as P38 and NFkb (related to cell proliferation), SIRT-1 (related to cell survival), PGC1 and TFAM (related to mitochondrial biogenesis). Statistical analysis of ANOVA two-way variance was used and p<0,05 was considered significant. This study was approved by the Ethics Committee (1285201021). The evaluation of the cicatrization process revealed that the group treated with complete formula showed a higher border approximation on the 3º day of treatment in the inflammatory phase of wound healing. On the 7º, 10º and 12º days of treatment, the results of the complete formula maintain elevated wound closure compared with the Vehicle and half formula. No difference was observed at 14º day. There?s no statistical difference on epithelialization and neovascularization analysis. Complete formula has an increase of NFkb and is sustained until remodeling phase, as so has a decrease of TFAM on inflammatory phase. Our results demonstrate that the complete formula was able to reduce healing time involving cell proliferation. Thus,our study suggests that natural compounds by using nanocarriers may have a beneficial effect on the cicatrization restoring the barrier function of the skin during cutaneous wounds.