Sistemas nanocarreadores de pequenos de RNAs de interferência (siRNA) em combinação com antifúngicos aplicados ao tratamento da ceratite amebiana

Abstract

Amebas de vida livre do gênero Acanthamoeba são protozoários amplamente distribuídos no ambiente, encontrados em diversos lugares como no solo, mar e rio. São considerados seres anfizóicos, pois são capazes de existir livremente na natureza ou causar doença em um hospedeiro mamífero. A ceratite amebiana (CA) é a infecção mais comum no ser humano causada por Acanthamoeba spp. CA é uma inflamação da córnea grave que pode levar a perda de visão e está associada frequentemente a usuários de lentes de contato e má higienização de estojos e lentes de contato. Atualmente o tratamento é realizado em combinação com agentes quimioterápicos como biguanidas, diamidinas, antissépticos, antiparasitários, antibióticos e agentes antifúngicos. Em seu ciclo de vida, Acanthamoeba spp. apresentam-se como cistos ou trofozoítos. O trofozoíto é a forma metabolicamente ativa da ameba, possui a capacidade de se reproduzir, locomover, alimentar e aderir as células hospedeiras, por outro lado, o cisto é a forma metabolicamente inativa, possuem dupla parede e conferem resistência ao protozoário, pois resistem a fatores como: mudanças de pH, temperatura, privação de nutrientes e exposição a compostos químicos. O ergosterol é o principal esterol presente nas membranas de trofozoítos e cistos de Acanthamoeba spp. Dessa forma, o presente trabalho teve como objetivo aplicar o antifúngico voriconazol livre associado ao pequeno RNA de interferência (siRNA) 14alfa-demetilase para o controle da proliferação e encistamento da Acanthamoeba spp. A construção da sequência do pequeno RNA de interferência (siRNA) foi previamente desenvolvida por Camargo, (2021) e foi utilizado para o silenciamento da enzima envolvida na síntese do ergosterol (14 alpha desmetilase). Os ensaios de atividade biológica foram realizados com a cepa Acanthamoeba castellanii (ATCC 50492). Os trofozoítos foram incubados durante 24 horas com formulações com voriconazol e voriconazol associado ao siRNA. Através do ensaio Alamar Blue foi possível observar com as diferentes concentrações do voriconazol, diminuição de 35,1% da viabilidade dos trofozoítos incubados com voriconazol livre e 15,4% do voricanozol livre associado ao siRNA. O presente trabalho utilizou siRNA livre sem a incorporação em nanoemulsão, tendo em vista que no trabalho de Camargo, 2021 a viabilidade dos trofozoítos de Acanthamoeba spp. demonstram atividades semelhantes do siRNA livre e siRNA com a nanoemulsão dado ao potencial fagocitico da ameba.