Influência do vírus ZIKA sobre o desenvolvimento dos ossos da calota craniana e as relações moleculares com o desenvolvimento do córtex cerebral

Abstract

Desde o estabelecimento da correlação entre os casos de microcefalia congênita registrados no nordeste do Brasil e a infecção pelo vírus Zika (ZIKV), muitos trabalhos foram realizados na tentativa de compreender como o ZIKV causa a microcefalia. Apesar do esforço coletivo empregado até o momento, ainda são necessárias explicações mais robustas que detalham os mecanismos moleculares associados às alterações morfológicas mediadas pelo ZIKV. A síndrome microcefálica induzida pelo ZIKV está fortemente relacionada com alterações no desenvolvimento dos ossos do crânio e Sistema Nervoso Central (SNC). A técnica de hibridização in situ, por permitir a análise da expressão gênica em embriões inteiros, possibilita análises fundamentais para a compreensão do contexto molecular associado à microcefalia induzida pelo ZIKV. A otimização da técnica de hibridização in situ em embriões aviários, infectados pelo ZIKV, é um passo fundamental para o desenvolvimento desse projeto. Sendo assim, nesses 3 meses de bolsa foram determinados critérios relativos à preservação do tecido embrionário, preparação de sonda de RNA conjugada à digoxigenina (RNA-Dig), padronização de reagentes e a otimização das condições da reação. Para essa otimização foram utilizados embriões de 72 horas e 96 horas de desenvolvimento de Gallus gallus. As marcações foram realizadas com sondas de RNA-Dig direcionadas para os RNAm de Fgf8 (Fator de Crescimento de Fibroblastos tipo 8) e EdnrB2 (receptor de endotelina do tipo B2), proteínas relacionadas à sinalização e diferenciação de tecidos craniofaciais e ao fenótipo melanocítico, respectivamente. Para confirmar a padronização e especificidade das marcações obtidas, nossos embriões foram comparados a imagens de embriões disponíveis em bancos de dados de hibridização in situ de Gallus gallus (GEISHA - http://geisha.arizona.edu/). Essas comparações nos permitiram concluir que os procedimentos e protocolos utilizados nas duas marcações foram completamente satisfatórios, com marcações específicas e praticamente idênticas às imagens do GEISHA. Os resultados alcançados indicam a possibilidade de utilização deste protocolo na continuidade das investigações dos mecanismos moleculares envolvidos na microcefalia induzida pelo ZIKV.