Aspectos relacionados ao desenvolvimento de um medicamento fitoterápico: preparação e avaliação biológica de extrato seco padronizado de erva mate (Ilex paraguariensis St. Hil.)

Abstract

Ilex paraguariensis A. St.-Hil, popularmente conhecida como erva-mate, é muito utilizada em bebidas tradicionais na região Sul do Brasil, como chimarrão, tererê e chá-mate. Efeitos como atividade antiherpética, antidiabética, cicatrizante, anti-inflamatória e estimulante, já relatados, estão relacionados diretamente à sua composição química. Estudos anteriores mostraram que a atividade antiherpética está relacionada à concentração de compostos fenólicos, mais especificamente o ácido clorogênico e cafeico. O presente trabalho teve como objetivo elucidar e compreender aspectos do uso de plantas como fonte de medicamentos, tendo enfoque em um estudo de caso sobre Ilex paraguariensis A.St.-Hil, pesquisando seu efeito antiviral conhecido. Para isso, um estudo de caracterização da matéria-prima vegetal foi realizado, constituído de ensaios de perda de dessecação e teor de extrativos, sendo seus resultados 9,65% e 38,28%, respectivamente. Com base em estudos anteriores, a extração foi realizada nas seguintes condições: matéria-prima vegetal a 10% (m/m), líquido extrator uma solução hidroalcoólica na concentração 20% (v/v), técnica de extração a turbolização, com velocidade de extração de 13.500 rpm por 5 minutos. Esta técnica foi utilizada por proporcionar o quase esgotamento da matéria-prima vegetal. A solução extrativa obtida foi caracterizada pela determinação de resíduo seco e concentração de compostos fenólicos. Os resultados obtidos, respectivamente, foram de 3,32% (m/m) e 192,59 (μg/mL). Para a continuidade dos estudos, o extrato foi seco por liofilização. A avaliação da atividade antiviral, foi realizada previamente ensaio de citotoxicidade, com células de linhagem Vero, nas concentrações decrescentes de 2500 a 2,44 μg/mL, sendo os meios MEM e PBS utilizados para diluição. Os resultados de CC50 (concentração de cada amostra capaz de reduzir em 50% a viabilidade celular) foram de 518,1 e 402,4, não apresentando citotoxicidade na linhagem escolhida. Para avaliação da atividade antiviral, foram utilizadas cepas sensíveis (KOS) e resistentes (29R) ao medicamento Aciclovir, em meios MEM (meio essencial mínimo) e tampão fosfato salino (PBS). O IS (índice de seletividade) foi de 4,86 e 5,58 para as cepas KOS e 29R, respectivamente, quando diluído em MEM, o que poder ser considerado um resultado promissor para um extrato total de planta.

Ilex paraguariensis A. St.-Hil, popularly known as yerba mate, is widely used in traditional drinks in southern Brazil, such as chimarrão, tererê and mate tea. Effects such as anti-heretic, anti-diabetic, healing, anti-inflammatory and stimulating activity, already reported, are directly related to its chemical composition. Previous studies have shown that antiherpetic activity is related to the concentration of phenolic compounds, more specifically chlorogenic and caffeic acid. The present work aimed to elucidate and understand aspects of the use of plants as a source of medicines, focusing on a case study on Ilex paraguariensis A.St.-Hil, researching its known antiviral effect. For this, a study of the characterization of the vegetable raw material was carried out, constituted by tests of loss of desiccation and extractives content, with its results being 9.65% and 38.28%, respectively. Based on previous studies, the extraction was carried out under the following conditions: vegetable raw material at 10% (m/m), extractor liquid, a hydroalcoholic solution at a concentration of 20% (v/v), turbolization extraction technique, with speed of extraction of 13.500 rpm for 5 minutes. This technique was used because it provides the almost depletion of the vegetable raw material. The extractive solution obtained was characterized by the determination of dry residue and concentration of phenolic compounds. The results obtained, respectively, were 3.32% (m/m) and 192.59 (μg/mL). For further studies, the extract was dried by lyophilization. The evaluation of the antiviral activity, previously performed cytotoxicity assay, with cells of lineage Vero, in decreasing concentrations of 2500 to 2.44 μg/mL, being the MEM and PBS media used for dilution. The results of CC50 (concentration of each sample capable of reducing cell viability by 50%) were 518.1 and 402.4, showing no cytotoxicity in the chosen strain. For evaluation of antiviral activity, sensitive (KOS) and resistant (29R) strains to the drug Acyclovir were used, in MEM media (minimum essential medium) and phosphate buffered saline (PBS). The IS (selectivity index) was 4.86 and 5.58 for the KOS and 29R strains, respectively, when diluted in MEM, which can be considered a promising result for a total plant extract.