Validação manual de proteínas identificadas por espectrometria de massas de Trypanosoma (Herpetosoma) rangeli

Abstract

A abordagem proteômica com base em espectrometria de massa (MS/MS) vem sendo utilizada para identificar biomarcadores acoplada com outras técnicas proteômicas ou somadas aos marcadores bioquímicos tradicionais. Essa ferramenta é a base para identificar potenciais marcadores para o diagnóstico diferencial da Doença de Chagas ocasionada pelo Trypanosoma cruzi e a infecção por Trypanosoma rangeli. O T. rangeli não apresenta características patogênicas para hospedeiros vertebrados, no entanto, a infecção por T. rangeli induz uma resposta imune humoral. O compartilhamento de antígenos de superfície com T. cruzi ocasiona em ensaios sorológicos uma reatividade cruzada, representando um problema para o diagnóstico da doença de Chagas e resulta em um diagnóstico falso-positivo. Dessa forma, é evidente a necessidade de diferenciação das infecções ocasionadas por T. cruzi e por T. rangeli. Este trabalho teve como objetivo Identificar de forma manual as proteínas de T. rangeli que tiveram apenas um peptídeo assinado por espectrometria de massas e caracterizá-las funcionalmente in silico. Foram identificadas mais 28,64% de proteínas quando comparadas às proteínas validadas por ≥2 ou mais peptídeos, 13,04% a mais de proteínas validadas (18 proteínas) das quais 6 foram caracterizadas pela primeira vez para T. rangeli: 40S ribosomal, Small GTP binding protein, Quinone oxidoreductase, Histone H2A, CAS/CSE importin domain protein e Heat Shock Protein. Esses resultados demonstram que a validação de proteínas identificadas com apenas 1 peptídeo é importante pois aumenta a quantidade de proteínas de um determinado organismo disponíveis para análise, o que proporciona um melhor entendimento biológico e funcional desses organismos.

The proteomic approach based on mass spectrometry (MS / MS) has been used to identify biomarkers coupled with other proteomic techniques or added to traditional biochemical markers. This tool is the basis for identifying potential markers for the differential diagnosis between Chagas disease caused by Trypanosoma cruzi and Trypanosoma rangeli infection. T. rangeli does not present pathogenic characteristics for vertebrate hosts, however, infection by T. rangeli induces a humoral immune response. The sharing of surface antigens with T. cruzi causes a cross reactivity in serological tests, representing a problem for the diagnosis of Chagas disease and results in a false-positive diagnosis. Hence, the need for differentiation of T. cruzi and T. rangeli infections is evident. This work aimed to manually identify, the T. rangeli proteins that had only one peptide signed by mass spectrometry and functionally characterize it in silico. A further 28.64% of proteins were identified when compared to proteins validated by ≥ 2 or more peptides, 13.04% even more validated proteins (18 proteins) of which 6 were characterized for the first time for T. rangeli: 40S ribosomal, Small GTP binding protein, Quinone oxidoreductase, Histone H2A, CAS / CSE importin domain protein and Heat Shock Protein. These results demonstrate that the validation of proteins identified with only 1 peptide is important because it increases the amount of proteins available of a determined organism for analysis, which provides a greater biological and functional understanding of these organism.