Concentrações Inibitória e Bactericida Mínimas na Atividade Antimicrobiana da Lisozima

Abstract

A lisozima é uma proteína catiônica que atua por meio de sua atividade muramidase, via catálise da hidrólise das ligações presentes nos peptidoglicanos que compõem a parede celular de bactérias gram-positivas. Essa enzima faz parte do sistema imunológico humano, contribuindo na resposta imunológica natural do indivíduo. Concentrações que variam de 1 a 57 μg/mL são encontradas na saliva, porém, na literatura, não há consenso sobre a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM) mais efetiva para diferentes microrganismos de forma simultânea, sendo esse o objetivo do presente estudo. Foram analisadas cepas de Streptococcus mutans (UA 159) e Staphylococcus Aureus (ARC 25923) em diferentes concentrações de Lisozima (Sigma Aldrich, Merch, USA) (20-500 μg/mL) de modo a determinar a CIM e CBM para ambos simultaneamente. O controle foi feito com NaOCl (1%) e Clorexidina líquida (2%). A análise da turbidez dos meios reacionais em placas de 96 poços foi feita por espectrofotometria (Leitor ELISA LD 96) (comprimento de onda de 630 nm) antes e após incubação por 24 e 48 h a 37° C. Foi realizado plaqueamento dos meios para avaliar o efeito bactericida e bacteriostático. Os dados foram analisados por ANOVA fatorial seguida de Tukey (α = 0,05). Para o S. mutans, a CIM foi de 20 μg/mL enquanto que a CBM foi de 300 μg/ml em 24 h. No caso do S. aureus, a CIM foi em 300 μg/mL em 24 h não sendo observado efeito bactericida e, portanto, não sendo possível determinar a CBM. Assim, é possível concluir que a Lisozima é mais efetiva para o S. mutans em comparação ao S. aureus, sendo apenas a CIM de 300 μg/mL efetiva para ambos os patógenos de forma simultânea.

Lysozyme is a cationic protein that acts through its muramidase activity, through the catalysis of the bond hydrolysis, presented by the peptidoglycans that make up the gram-positive bacterial cell wall. This enzyme is part of the human immune system, contributing to the individual’s natural immune response. Concentration ranging from 1 to 57 μg/mL are found in saliva, however, in literature, there is no consensus about the most effective minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericide concentration (MBC) for different microorganisms at the same time, which was the main purpose of the present study. Streptococcus mutans (ATCC 25922) and Staphylococcus Aureus (see reference) were analyzed with different lysozyme concentrations (20-500 μg/mL) to determine the most effective MIC and MBC of both simultaneously. Control groups were made with NaOCl (1%) and liquid Chlorhexidine (2%). The analysis of the reaction medium’s turbidity on 96-well plates was made via spectrophotometry (ELISA LD 96) (wavelenght of 630 nm), before and after its incubation at 37º C, for 24 and 48 hours. The mediums were plated to verify their bactericidal and bacteriostatic effects. Factorial ANOVA, followed by Tukey (α = 0,05), was used to analyze data. Regarding S. mutans, CIM was 20 μg/mL while the CBM was 300 μg/mL after 24 h. Considering S. aureus, the CIM was 300 μg/mL after 24 h, without bactericidal effect observed and, therefore, it was not possible to determine the CBM. Thus, it is possible to conclude that the Lysozyme is more effective for S. mutans in comparison to S. aureus, and the MIC of 300 μg/mL effective for both pathogens simultaneously.