Análise da expressão relativa de genes pró e antiviral em células Jurkat estimuladas com a proteína Tat do HIV-1

Abstract

O vírus da imunodeficiência humana do tipo 1 (HIV-1) é capaz de infectar células do sistema imune humano através da interação com receptores encontrados na superfície dessas células. A síndrome da imunodeficiência humana (aids) é considerada o estágio final da infecção pelo HIV, podendo desenvolver-se de forma diferenciada entre diferentes indivíduos devido a fatores genéticos e imunológicos. Objeto deste estudo, o gene regulador tat tem importante atuação na fase inicial da infecção, garantindo a replicação viral e influenciando a patogenicidade da doença, pois codifica uma proteína responsável pela transativação da replicação dos genes virais. A forma extracelular da proteína Tat, liberada por células infectadas, é capaz atuar sobre células responsivas não infectadas e induzir a apoptose nessas células através do efeito bystander. O objetivo deste TCC foi avaliar os níveis de expressão de moléculas pró e antiviral em células Jurkat estimuladas com a proteína recombinante Tat do HIV-1 subtipo C, através da técnica de qPCR. Os resultados foram obtidos pelo método ΔΔCq, utilizando a expressão relativa dos genes de interesse TRIM5α e LEDGF/p75 comparada com a expressão relativa dos genes de referência TBP e B2M. Subsequentemente utilizou-se o programa GraphPad Prisma versão 6 para a análise de ANOVA one-way com pós teste Bonferroni. Para ambos os genes observou-se um aumento significativo na expressão relativa nas primeiras 24 horas de incubação (p<0,0001), havendo uma redução, também significativa, em 48 horas, retornando aos níveis basais em 72 horas (não significativo). Sabendo-se que a proteína Tat do HIV-1 induz a apoptose em células Jurkat por efeito bystander, a diminuição significativa observada na expressão de TRIM5α e LEDGF/p75, ao longo do período de incubação, também depende de características da própria regulação gênica ou do ambiente celular.