Caracterização molecular e do perfil transcricional do peptídeo antimicrobiano stylicina no camarão Litopenaeus vannamei

Abstract

Doenças infecciosas são uma das maiores limitações para o desenvolvimento sustentável da carcinicultura mundial. Os peptídeos antimicrobianos (AMPs) são moléculas essenciais do sistema imune inato, os quais participam de modo efetivo no combate a agentes infeciosos. As stylicinas (STY) são peptídeos aniônicos, inicialmente identificados no camarão Litopenaeus stylirostris (Ls-Stylicin1 e Ls-Stylicin2), e que apresentam atividade contra fungos filamentosos. Até o presente momento, esses AMPs foram descritos apenas em duas espécies de peneídeos, assim, o objetivo do presente trabalho foi identificar e caracterizar sequências codificantes para stylicinas na espécie de camarão mais cultivada no mundo, Litopenaeus vannamei. Foram utilizadas sequências conhecidas de stylicinas para a identificação desse AMP em L. vannamei. As sequências nucleotídicas e aminoacídicas obtidas foram analisadas utilizando-se ferramentas de bioinformática. A distribuição da expressão gênica das stylicinas foi avaliada em oito diferentes tecidos/órgãos de animais estimulados ou não com bactérias Vibrio harveyi ATCC 14126 mortas por calor e o perfil transcricional nos hemócitos analisado após 48 h de uma infecção viral (WSSV) ou bacteriana (V. harveyi) por PCR quantitativa em tempo real. Em L. vannamei, foram identificados dois grupos de stylicinas: Litvan STY1 e Litvan STY2, com homologia às stylicinas Ls-Stylicin1 e Ls-Stylicin2, respectivamente. No grupo Litvan STY1, foram identificadas sequências com a região codificadora completa (Litvan STY1-1 com 315 pb e Litvan STY1-2 com 318 pb) enquanto que no grupo Litvan STY2 foram identificadas apenas sequências parciais. Assim como as demais stylicinas, as sequências de L. vannamei contêm um peptídeo sinal (22 resíduos de aminoácidos) seguido de um peptídeo maduro (8,8-9 kDa) aniônico contendo uma região N-terminal rica em resíduos de prolina e uma região C-terminal com 13 resíduos conservados de cisteína. Os transcritos de ambas stylicinas foram detectados na maioria dos tecidos/órgãos estudados: hemócitos, brânquias, estômago, intestino médio e posterior, além de cordão nervoso para Litvan STY2. Em animais estimulados, foi observado um aumento de transcritos no estômago, intestino médio e brânquias para Litvan STY1 e nos intestinos médio e posterior e cordão nervoso para Litvan STY2. Após a infecção bacteriana, apenas os níveis de expressão de Litvan STY2 foram induzidos nos hemócitos de camarões. Não foram observadas diferenças nos níveis transcicionais das duas stylicinas após a infecção viral. Em conclusão, na espécie L. vannamei as stylicinas formam um grupo diverso de AMPs, cuja expressão é diferencialmente modulada nos hemócitos frente a infecções bacterianas.