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Abstract:
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Células-tronco embrionárias são células pluripotentes extraídas da massa interna do blastocisto. Elas darão origem a todos os tecidos do corpo e anexos embrionários. Após a implantação na parede uterina, as células da massa interna do blastocisto diferenciam-se em epiblasto e hipoblasto. As células do epiblasto ainda são capazes de originar derivados dos três folhetos embrionários, mas perdem a capacidade de originar anexos embrionários. O fator de transcrição Sox2 é um dos principais reguladores da pluripotencialidade celular. Quatro regiões reguladoras foram descritas no controle da expressão do gene Sox2, SRR1, SRR2, SRR18 e SCR. Porém, não é evidente se todas essas regiões reguladoras demonstram similar importância em seu controle. Para elucidar essa questão, o presente trabalho analisou os efeitos da deleção das regiões reguladoras SRR1, SRR2, SRR18 e SCR sobre a expressão de Sox2 em células-tronco embrionárias em modelo murino. Somente a deleção da região SCR, em ambos os alelos, eliminou a expressão da proteína Sox2. A seguir, célulastronco embrionárias contendo deleções heterozigóticas combinadas nas regiões SRR1, SRR2, SRR18, simultaneamente, e na região SCR foram diferenciadas em células-tronco induzidas a epiblasto. A expressão de genes indicadores de estado celular foi analisada antes e após o processo de diferenciação. Enquanto a transcrição dos genes Esrrb, Klf4, Nanog, Oct4 e Tbx3 diminuiu, a transcrição dos genes Dnmt3a, Otx2, Pou3f1 e Wnt8a aumentou após a diferenciação para células induzidas a epiblasto. A expressão de Sox2 proveniente de cada alelo também foi analisada. Novamente, somente a deleção da região SCR resultou em grande impacto na expressão de Sox2 em ambos os estados celulares. Por fim, a região SCR foi caracterizada in silico como tendo uma grande quantidade de modificações em caudas de histonas que permitem a aderência de fatores de transcrição em células-tronco embrionárias. Muitos deles contribuem para a sustentação da pluripotencialidade de células-tronco embrionárias, como Ctcf, E2f1, Esrrb, Klf4, Nanog, Oct4, Smad1, Stat3, Tfcp2l1 e o própria Sox2. A região SCR também possui diferentes motivos de DNA que permitem a ligação desses fatores de transcrição. Juntos, esses dados sugerem que a expressão de Sox2 é controlada majoritariamente pela região reguladora SCR em células-tronco embrionárias e células-tronco induzidas a epiblasto. |
