Infecção natural por Leishmania sp. em flebotomíneos capturados no foco de transmissão de Leishmaniose Tegumentar Americana no município de Piçarras, litoral norte do Estado de Santa Catarina e identificação específica do parasito em amostras clínicas e em cepas isoladas de pacientes.

Abstract

As Leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários do gênero Leishmania, que acometem cerca de 12 milhões de indivíduos em 88 países em todo o mundo. A transmissão do parasito ao homem, assim como para outros mamíferos, ocorre através da picada de insetos fêmeas pertencentes a subfamilia Phlebotominae. Devido ao surgimento de novos casos dessa parasitose no norte do Estado de Santa Catarina, um amplo estudo clínico e epidemiológico vem sendo desenvolvido no intuito de minimizar e até eliminar a transmissão do parasito. Assim, o presente estudo objetivou detectar a presença de Leishmania spp. em flebotomíneos capturados na cidade de Piçarras e caracterizar as amostras de Leishmania isoladas de pacientes provenientes dos focos de LTA no litoral norte do Estado. Para tanto, foram capturados nos meses de março, nos anos de 2006 e 2007, em armadilhas luminosas tipo CDC, cerca de 3.000 exemplares de flebotomíneos na cidade de Piçarras, norte do estado de Santa Catarina, pertencentes as espécies Nyssomyia neivai, Lutzomyia migonei e Lutzomyia fisheri, sendo 98% de Ny. neivai. Para pesquisa da infecção natural, 886 fêmeas de Ny. neivai e 23 fêmeas de Lu. migonei foram divididas em 107 pools (102 de Ny. neivai e 5 de Lu. migonei) de aproximadamente 10 indivíduos e submetidos a extração de DNA segundo Collins e colaboradores, 1987. Os iniciadores PhS1 e PhS2 e 150 e 152 foram utilizados para amplificação de DNA de Phlebotominae e o kDNA de Leishmania sp., respectivamente. Todos os 107 pools examinados apresentaram a banda de 220pb específica de Phlebotominae e 11 (9,8%) apresentaram também a banda de 120pb específica de Leishmania sp. A identificação específica dos produtos de PCR foi feita através de Southern Blot usando sondas para Le. braziliensis e Le. amazonensis, conjugadas com peroxidase através do Kit ECL, confirmando a presença de Le. braziliensis nos 11 pools positivos. Para a determinação especifica de Leishmania sp. presente nas amostras de pacientes, foi utilizada a técnica da PCR-RFLP. DNA dos pacientes foram amplificados utilizandose iniciadores 150 e 152 e foram submetidos a digestão com a enzima HaeIII e AvaI, separadamente. Foram testados 124 pacientes, um apresentou padrão de bandas compatível com a espécie Le. amazonensis, os outros 123 apresentaram padrão de restrição igual ao de Le. braziliensis. Estes resultados mostram pela primeira vez a infecção natural de Ny. neivai por Le. braziliensis no Brasil e sugerem a presença de dois ciclos de transmissão da parasitose no estado, devido a confirmação da existência de Le. amazonensis nos pacientes.