Métodos Para a Análise da Estabilidade e Infecciosidade da Cepa Vacinal de Rotavírus A em Diferentes Matrizes Aquáticas e Tempos de Estocagem

Abstract

Os Rotavírus (RVA) estão envolvidos com muitos surtos de diarreia em crianças menores de 5 anos de idade, principalmente devido às más condições sanitárias. Hoje em dia, duas vacinas estão disponíveis e seus impactos na melhoria da saúde pública já foram apresentados. No entanto, não existem estudos avaliando o impacto destas cepas vacinais no ambiente aquático. Já que são vacinas atenuadas, o objetivo do estudo foi avaliar a estabilidade de uma cepa vacinal do Rotavírus (RotaTeq) em diferentes matrizes aquáticas em função do tempo e da temperatura de estocagem. O RVA foi propagado em células MA104 e o título do estoque viral foi obtido por ensaio de placa de lise (UFP) padronizado neste trabalho. A quantidade de 2,2 x 107 UFP/mL do estoque viral foi semeada em diferentes matrizes de água: P (Lagoa do Peri, Água de manancial); C (Água de consumo, tratada não clorada); e L (Lagoa da Conceição, Água de recreação). Alíquotas foram armazenadas nas temperaturas de 22 e 4ºC para simular temperatura ambiental e de armazenamento de amostra em laboratório/Posto de Saúde respectivamente. A estabilidade foi avaliada por UFP e por RT-qPCR em diferentes tempos mensurados em "dias de armazenamento" por até 180 dias. A redução do título viral foi expressa em valores de redução de logarítmica (log10). Em todos os casos, os valores mais elevados de redução log10 por UFP foram observados nas amostras de água estocadas a 22ºC diferentemente do que ocorreu com o RT-qPCR onde as maiores reduções de cópias genômicas foram observadas nas amostras estocadas a 4ºC. A presença de outros micro-organismos, assim como as propriedades físico-químicas intrínsecas das amostras podem explicar a diferença nos valores de redução observados, podendo ter afetado a estabilidade viral e/ou promovido a agregação destes.

Rotavirus (RVA) is involved with many outbreaks of diarrhea in children under 5 years of age, mainly due to poor sanitation conditions. Nowadays, two vaccines are available and their impact on improving public health was already presented. However, there are no studies evaluating the impact of the presence and stability of these vaccine strains in the aquatic environment. Since they are attenuated vaccines, the objective of this study was to evaluate the influence of the time and temperature on the stability of the RVA vaccine strain (RotaTeq) in environmental waters. The RVA was propagated in MA104 cells and the titer of the viral stock was measured by plaque assay (UFP) standardized in the present study. An amount of 2.2 x 107 UFP/mL of the viral stock was seeded in three different surface water matrices: P (Lagoa do Peri, surface water lagoon); C (surface unchlorinated drinking water); and L (Lagoa da Conceição, backish water lagoon from recreational area). Aliquots (1,0 mL) were stored at temperatures of 22 and 4°C to simulate, respectively, environmental and laboratory/Health Clinics storage temperatures. The stability was evaluated by UFP and RT-qPCR over 180 day's period. The viral titre reduction was expressed as log reduction values (log10 = Nt/N0). In all cases, the highest values of log10 reduction by UFP was observed in the water samples stored at 22 °C. By the other hand, the RT-qPCR showed the largest genome copies reductions on samples stored at 4°C. The presence of other microorganisms, as well as the intrinsically physicochemical properties of the samples may explain the difference in the observed reduction values, which may affect the survival of the virus and/or promote the aggregation.