Caracterização molecular da enzima cistationina β-sintase (cβs) em Trypanosoma rangeli

Abstract

Trypanosoma rangeli é um parasitos hemoflagelados que infecta insetos e mamíferos. Possuem um sistema de resposta antioxidante baseada no ditiol tripanotiona (T[SH]2), capaz de neutralizar os radicais livres e peróxidos, além de manter o equilíbrio redox intracelular. A sua biossíntese depende da disponibilidade do aminoácio sulfurado, a cisteína. Tem se descrito duas rotas distintas para a síntese da cisteína, a via de síntese de novo, catalisada pela cisteína sintase (CS) e a via de transulfuração reversa catalisada pela cistationina β-sintase (CβS). O presente estudo visou caracterizar molecularmente a CβS de T. rangeli, mediante a clonagem e expressão heteróloga do gene. A caracterização molecular, permitiu estabelecer que TrCβS possui uma ORF de 1121pb e codifica para uma proteína de 373 aa (44 kDa), que apresentam todos os domínios catalíticos típicos dessa família de enzimas. Os ensaios de Southern blot revelaram que o gene CβS T. rangeli aparece como cópia única em seu genoma. O antisoro produzido a partir da proteína recombinate rTcCβS reconheceu a proteína de tamanho esperdado (~44kDa) nos extratos proteicos de T. rangeli e T. cruzi com semelhante intensidade. A avaliação da expressão da CβS nas diferentes formas evolutivas do T. rangeli revelou que não é estágio-dependente. Os resultados obtidos neste estudo constituem o primeiro estudo da presença de CβS em T. rangeli.

Trypanosoma rangeli is a parasite that infects hemoflagellates insects and mammals. Have a system of antioxidant response based on dithiol trypanothione (T[SH]2), able to neutralize free radicals and peroxides, in addition to maintaining the intracellular redox balance. The biosynthesis depends on the availability of aminoácio sulphide, cysteine. Has two distinct routes described for the synthesis of cysteine, de novo pathway, catalyzed by cysteine synthase (CS) and reverse transsulfuration pathway catalyzed by cystathionine β-synthase (CβS). The present study aimed at characterizing the molecular CβS T. rangeli by cloning and expression of heterologous gene. The molecular characterization established that TrCβS an ORF 1121pb and encodes a protein of 373 aa (44 kDa), which are all typical catalytic domains of this family of enzymes. Southern blot assays showed that the CβS T. rangeli appears as a single copy gene in their genome. The antiserum produced from the recombinant protein recognized the protein rTcCβS esperdado size (~ 44kDa) protein extract from T. cruzi and T. rangeli similar intensity. The evaluation of the expression of CβS their different developmental forms of T. rangeli showed that is not stage-dependent. The results obtained in this study represent the first report of the presence of T. rangeli in CβS.