Morfo-histodiferenciação de estruturas semelhantes a protocormos de Cattleya Tigrina A. Rich (Orchidaceae) cultivadas in vitro através da técnica de camada fina celular

Abstract

Cattleya tigrina é orquídea epífita de grande valor econômico ornamental que, todavia, encontra-se ameaçada. A cultura de tecido vegetal e suas técnicas, como a de camada fina celular (TCL), vêm sendo usadas para conservação de espécies como C. tigrina. Entretanto, pouco se sabe sobre as estruturas semelhantes a protocormos (ESP) advindas da técnica de TCL. Este estudo visa analisar a morfo-histodiferenciação de ESPs desenvolvidas in vitro através da técnica de TCL em folhas de C. tigrina. Folhas oriundas de plântulas cultivadas in vitro foram destacadas, seccionadas e inoculadas em placa de petri contendo meio de cultura MS/2 suplementado com peptona de soja, AgNO3 e fitagel. O mesmo procedimento foi usado com folhas inteiras, como grupo controle. Observou-se o desenvolvimento das ESP por 107 dias, sendo amostras (folha seccionada e inteira) fixadas a cada sete dias. As amostras foram fixadas em gluteraldeído 2,5%, em tampão fosfato de sódio 0,1M, pH 7,2, infiltradas em historresina e coradas com azul de toluidina, para análise em microscopia óptica. Folhas in vivo foram utilizadas para a execução de testes histoquímicos. A folha é dorsiventral e hipoestomática. A epiderme é uniestratificada e os estômatos são anomocíticos. O mesofilo é formado por clorênquima com idioblastos contendo ráfides. O feixe vascular é colateral com bainha parenquimática perivascular. O surgimento das ESPs nas folhas seccionadas pelo TCL apresentou uma diferença de sete dias em relação ao grupo controle de folhas inteiras. As ESPs surgem associadas à região foliar seccionada. Histologicamente, a origem das ESPs advêm da epiderme. Atividade meristemática foi observada, desde o sétimo dia após o seccionamento pelo TCL, caracterizada por núcleos conspícuos, protoplasto denso, paredes delgadas e evidências de divisões celulares. ESPs assemelham-se ao ápice caulinar, com primórdios foliares aos 46 dias. Os resultados obtidos preenchem as lacunas sobre a morfo-histodiferenciação de ESPs de C. tigrina, reafirmando a eficácia da técnica de TCL para a micropropagação da espécie.

Cattleya tigrina, an epiphyte orchid, has great ornamental value, despite from that, this is an endangered species. Plant tissue culture through its techniques, like thin cell layer (TCL), has provided means to conserve species such as C. tigrina. However, scanty is the knowledge of the structure of the protocorm like bodies (PLB) that are produced using TCL technique. This study analyzes the morpho-histodifferentiation of PLBs obtained through the TCL of C. tigrina leaves. Leaves from in vitro seedlings were detached, sectioned and inoculated in a petri dish containing MS/2 media, supplemented with peptone, AgNO3 and phytagel. Equal procedure was applied to a non-sectioned leaf, as a control group. The development of the PLBs was observed for 107 days, each seven days along this period samples were fixed. The samples were fixed with glutaraldehyde 2.5% in 0.1M sodium phosphate buffer, pH 7.2, embedded in hydroxyethyl methacrylate, stained with toluidine blue and further analyzed in light microscope. In vivo leaves were used for histochemical procedures. The leaf is dorsiventral and hypostomatic. The epidermis is uniseriated and the stoma anomocytic. The mesophyll is composed by a chlorenchyma and idioblast containing raphydes. The vascular bundle is collateral and surrounded by a parenchymatic perivascular sheath. In the sectioned leaves the constitution of the PLBs occurs seven days earlier than in non-sectioned leaves. PLB’s were formed in the area that the sectioning is made. Histologically, the PLBs are derived from the epidermis. Starting the seven days after the sectioning, intense meristematic activity was characterized by the conspicuous nucleus, dense protoplast, thin cell walls and cell division evidence. The formed PLBs resemble an apical meristem, and have the first leaf primordia after 46 days. The obtained results fill in the gaps in the morphohistodiferentiation of C. tigrina’s PLB and indicate the effectiveness of the TCL technique in the micropropagation.