Estudo in vitro das citocinas envolvidas na resposta inflamatória de macrófagos murinos à infecção pelo vírus da dengue.

Abstract

A dengue é uma doença que tem como agente etiológico o Dengue virus (DENV), da família Flaviviridae, do gênero Flavivirus. Mais de 50 milhões de infecções ocorrem anualmente no mundo. Níveis altos de diferentes citocinas foram observados na infecção por DENV. Sabe-se que após a infecção pelo DENV in vitro, os macrófagos, após o reconhecimento do vírus, liberam TNF-α, IFN-α, IL-1 e IL-6 fator ativador de plaquetas e histaminas. Outras citocinas também foram correlacionadas in vivo com a doença. Dentre as citocinas pró-inflamatórias encontradas in vivo e in vitro, em células infectadas com o DENV ou em pacientes com a febre hemorrágica da dengue (DHF), estão o TNF-α, o IFN-γ, o IFN-β, a IL-2, a IL-4, a IL-5, a IL-6, a IL-10, o IFN-α e o hCF. Outros mediadores da resposta inflamatória foram encontrados em pacientes com infecção aguda pelo DENV, como a enzima NOS2. As citocinas desempenham um papel sinérgico na superfície endotelial, contribuindo para o extravasamento do plasma e os seus níveis altos resultam no quadro grave da doença. Este estudo acompanhou, através de PCR em tempo real, as diferenças de cinética de expressão dos genes das principais citocinas inflamatórias (TNF-α, IFN-β, IL-10, IL-6 e IL-12p40) e da enzima NOS2 liberadas por macrófagos murinos RAW 264.7 durante a infecção pelo DENV-1 e DENV-4 e durante o estímulo com LPS. No presente trabalho, foram observadas diferenças nas cinéticas de expressão dos genes destas citocinas e enzima quando induzidos por DENV-1, DENV-4 e LPS. Os genes do IFN-β e da IL-6 apresentaram expressão precoce. Os genes do TNF-α, IFN-β, IL-10, IL-6 e IL-12p40 apresentaram expressão intermediária, intermediária-tardia e tardia. O gene da enzima NOS2 também apresentou expressão tardia.

Dengue is a disease whose etiological agent is Dengue virus (DENV). This virus belongs to Flaviviridae family and Flavivirus genus. More than 50 million infections occur annually in the world. Elevated levels of different cytokines were observed in Dengue virus infection. It is well known that after DENV in vitro infection, macrophages, after virus recognition, secrete TNF-α, IFN-α, IL-1 and IL-6, which is an activating factor of platelets and histamine. Other cytokines were also in vivo correlated with dengue disease. Among pro-inflammatory cytokines identified in vivo and in vitro, in infected cells or in DHF patients, are TNF-α, IFN-γ, IFN-β, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, IFN-α and hCF. Other mediators of the inflammatory response were observed in patients with acute DENV infection, for example, the NOS2 enzyme. The cytokines play a mutually synergistic role in endothelial surface, inducing plasma leakage and their elevated level results in dengue severity. This study has identified, through real time PCR technique, the differences among the kinetics of genes expression of the major inflammatory cytokines (TNF-α, IFN-β, IL-10, IL-6 and IL-12p40) and of the NOS2 enzyme released by RAW 264.7 murine macrophage lineage during DENV-1 and DENV-4 infection and during LPS stimuli. In the current study, were observed differences between the gene expression kinetics of these cytokines and enzyme when induced by DENV-1, DENV-4 and LPS. The INF-β and IL-6 genes had early expression. The TNF-α, IFN-β, IL-10, IL-6 and IL-12p40 genes had intermediate, intermediate-late and late expression. The NOS2 gene also had late expression.