Efeito da S-nitrosilação nas enzimas tirosina fosfatases PtpA e PtpB de Mycobacterium tuberculosis

Abstract

O Mycobacterium tuberculosis possui duas proteínas tirosina fosfatases (PTPs) codificadas no seu genoma, PtpA e PtpB, ambas proteínas secretadas e importantes fatores de virulência dessa bactéria. A S-nitrosilação, a adição covalente de um grupo NO a resíduos de cisteína, é uma das principais reações do óxido nítrico (NO) com substratos biológicos e está relacionada a eventos de sinalização celular e à atividade microbicida desse radical. Nesse contexto, esse trabalho teve como objetivo investigar a susceptibilidade da PtpA e PtpB de M. tuberculosis à S-nitrosilação por ação do NO, bem como estudar os efeitos dessa modificação pós-traducional nessas proteínas. As proteínas PtpA e PtpB de M. tuberculosis foram expressas de maneira heteróloga, purificadas e submetidas a ensaios para avaliar a susceptibilidade à S-nitrosilação. Verificou-se que a PtpA é S-nitrosilada, enquanto que a PtpB não é susceptível à S-nitrosilação. Para determinar qual dos resíduos de cisteína da PtpA é modificado pelo NO, foram construídos os vetores de expressão para as mutações Cys11Ala, Cys16Ala e Cys53Ala. Juntamente com a PtpA, as proteínas mutadas foram utilizadas em ensaios de susceptibilidade à S-nitrosilação e em ensaios de atividade catalítica. Estabeleceu-se que a S-nitrosilação da PtpA ocorre no resíduo Cys53 e verificou-se que essa modificação reduz a atividade desse fator de virulência.