Detecção por abordagem molecular de uma lectina tipo-c na vieira Nodipecten nodosus (Bivalvia: pectinidae)

Abstract

Lectinas tipo-C ou CTLs são proteínas dependentes de Ca2+, capazes de reconhecer açúcares específicos da superfície de células e causar sua aglutinação. Estas proteínas podem estar associadas ao sistema imune, funcionando como proteínas de reconhecimento padrão (PRPs) que se ligam a padrões moleculares específicos associados a patógenos (PAMPs), os quais estão presentes em muitos vertebrados e invertebrados. Usualmente, as CTLs são compostas por diferentes subunidades proteicas e possuem um único domínio de reconhecimento de carboidratos (CRD) por subunidade. O objetivo deste estudo foi o de detectar, clonar e sequenciar, através de técnicas de biologia molecular, uma lectina da hemolinfa da vieira Nodipecten nodosus, espécie de importância comercial no litoral de Santa Catarina. Através de iniciadores específicos desenhados a partir da lectina AiCTL1 de Argopecten irradians, disponível em bancos gênicos públicos, foi possível amplificar, clonar e sequenciar parcialmente o cDNA correspondente a uma lectina tipo-C (CTL), que foi denominada de NnCTL. A expressão desta proteína foi investigada em vieiras desafiadas com componentes da parede de microorganismos (LPS e -1,3 glicanas) e vieiras não desafiadas. Sequências gênicas parciais correspondentes a esta proteína foram amplificadas em ambos os tratamentos, sugerindo que a produção de NnCTL se dá de forma constitutiva. A sequência parcial da NnCTL apresentou 88% de identidade com a AiCTL1 (BlastX). A sequência aminoacídica parcial deduzida da NnCTL obtida contém 118 aminoácidos, dos quais 117 fazem parte de seu CRD, e que representa cerca de 70% da lectina completa AiCTL1. Foram identificadas quatro cisteínas no CRD da NnCTL, sendo duas implicadas na formação de pontes internas de dissulfeto e duas cisteínas adicionais localizadas próximas à região Nterminal da molécula. Assim como a AiCTL1, a NnCTL contém apenas um motivo QPD (Gln-Pro-Asp) de ligação ao carboidrato D-galactose, sugerindo sua afinidade por esse açúcar. Durante este estudo tentou-se obter a sequência completa da NnCTL através da técnica RACE, porém não obtivemos sucesso até o momento. Estratégias alternativas serão utilizadas na tentativa de completar a sequência de NnCTL.