Análise dos efeitos do egf e do fgf2 sobre a diferenciação das células da crista neural truncal de codornas, in vitro

Abstract

A crista neural (CN) é uma população de células originadas das margens dorsais do tubo neural durante o desenvolvimento de vertebrados. Essas células possuem um alto potencial migratório e dão origem a múltiplos fenótipos como neurônios, células gliais, melanócitos e a diversos derivados mesenquimais. Sabe-se que essa diversificação de fenótipos é espacialmente e temporalmente influenciada por fatores do microambiente. Vários fatores de crescimento, incluindo o Fator de Crescimento de Fibroblasto-2 (FGF2) e o Fator de Crescimento Epidermal (EGF), têm sido identificados como sendo capazes de direcionar a diferenciação de progenitores multipotentes da CN para tipos celulares específicos. Nesse trabalho avaliamos o papel do FGF2 e do EGF na diferenciação dos progenitores da CN truncal (CNT) de aves, analisando a expressão dos fenótipos celulares: neurônios, células gliais, melanócitos e células musculares lisas. Para isso culturas de células da CNT foram tratadas com FGF2 (20ng/mL) e/ou EGF (10ng/mL). Os tratamentos foram realizados em dois períodos diferentes, durante as primeiras 24h da fase de migração das células da CNT (cultura primária), ou durante as primeiras 24h de cultura secundária (fase de diferenciação), após 15h de migração em cultura primária. As culturas secundárias foram mantidas por mais 6 dias quando as células foram fixadas e analisadas quanto à expressão dos diferentes fenótipos celulares. Os resultados demonstram que o tratamento com FGF2 nas primeiras 24h de cultura primária promoveu um aumento de 3x no número de células gliais em relação ao controle sem tratamento. Já o tratamento com EGF nesse mesmo período aumentou em 2x a proporção de neurônios e melanócitos em relação ao controle. O tratamento concomitante com FGF2 e EGF promoveu um aumento no número de neurônios, sendo que o número de melanócitos e células gliais não foi alterado. O tratamento das células da CNT com ambos os fatores de crescimento, no período de diferenciação, não promoveu alterações significativas na expressão dos fenótipos celulares analisados em relação ao controle. Estes resultados sugerem um efeito importante do FGF2 na diferenciação das células da CNT para o fenótipo glial e do EGF para neurônios e melanócitos. Desta forma, hipotetizamos uma possível ação competitiva desses fatores no progenitor indiferenciado bipotente glia-melanócito, e uma atuação do EGF também em um progenitor não responsivo ao FGF2, envolvido com diferenciação neurogênica . Os resultados sugerem ainda que ambos os fatores de crescimento são fundamentais nas primeiras 15h de migração para a determinação e/ou especificação dos progenitores multipotentes da CN