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A GBP é uma lipoglicoproteína plasmática envolvida tanto no transporte de lipídeos quanto no sistema imune de crustáceos, reconhecendo especificamente -1,3-glicanas da parede celular de fungos. A ligação do complexo GBP-glicanas na superfície das células imunocompetentes (hemócitos) promove a adesão celular e a exocitose de moléculas imunológicas, como as do sistema pró-fenoloxidase (proPO), que é um importante mecanismo de defesa em crustáceos. O objetivo desse estudo foi purificar e caracterizar a GBP dos camarões nativos Farfantepenaeus paulensis e Litopenaeus schmitti, bem como avaliar a sua participação sobre a ativação do sistema proPO e a sua capacidade aglutinante. A GBP foi purificada a partir do plasma através de precipitação por baixa força iônica seguida por cromatografia de troca aniônica. A fração purificada de GBP foi eluída com NaCl 0,22 M e identificada por western blotting como uma proteína monomérica de aproximadamente 100 kDa, reconhecida pelo anti-GBP policlonal de L. vannamei. A identidade da βGBP foi ainda confirmada por espectrometria de massa, mostrando que os resíduos idênticos da βGBP dos camarões nativos cobriram 10% e 16%, respectivamente, da sequência da βGBP de L. vannamei, demonstrando assim uma homologia relativa entre a βGBP desses três peneídeos. A βGBP complexada à laminarina induziu um aumento de 3 vezes na atividade específica da PO (395,56±8,89 e 422,22±11,56 U/min/mg em F. paulenis e L. schmitti, respectivamente) em relação à laminarina (148,44±26,67 e 113,33±30,89 U/min/mg) ou βGBP isoladas (129,78±4,44 e 171,11±3,11 U/min/mg). No entanto, nenhuma atividade serino-proteásica foi encontrada associada a essa ativação, não possibilitando a compreensão do mecanismo pelo qual o complexo βGBP-laminarina aumentou a ativação do sistema proPO nesses animais. A βGBP mostrou-se ainda capaz de aglutinar in vitro células de levedura, demonstrando a sua especificidade por β-1,3-glicanas e sugerindo tratar-se de uma molécula bivalente com, no mínimo, dois sítios de reconhecimento-padrão. Os resultados obtidos nesse estudo demonstram a relevante participação da molécula no sistema imune desses camarões e representam uma contribuição para um maior conhecimento do sistema imune dos camarões marinhos nativos. |
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