Avaliação da integridade de células espermáticas de Litopenaeus vannamei submetidas a criopreservação

Abstract

A fim de avaliar o potencial de criopreservação para células espermáticas de Litopenaeus vannamei, 74 espermatóforos foram extraídos manualmente de indivíduos sexualmente maduros. Após teste de toxicidade para definir concentração dos crioprotetores, suspensões de células espermáticas foram criopreservadas em grupos com solução de congelamento contendo crioprotetores distintos: dimetilsfulfóxido (DMSO) e etilenoglicol (EG) ambos à concentração de 10%. Cada tratamento foi dividido em subgrupos para estocagem em nitrogênio líquido por diferentes períodos de tempo: 0, 30, 60 e 90 dias, em triplicata. Após o descongelamento em banho Maria a 25ºC por cerca de 40 segundos, a integridade celular das suspensões foi analisada sob microscopia com coloração por eosina-nigrosina, e por citometria de fluxo. Não observou-se diferença significativa entre os crioprotetores utilizados. Para todos os tratamentos, as menores e as maiores mortalidades ocorreram em 0 e 90 dias, respectivamente. Através da técnica de coloração, a menor e a menor e maior mortalidade foram, 23,17% e 82,11% com DMSO e 29,94% e 83,72% com EG. Com citometria de fluxo as mortalidades foram 2,42% e 55,13% com DMSO; e 0,90% e 55,56 % com EG. O coeficiente de correlação de Spearman indicou correlação positiva (R=0,91) entre as duas técnicas utilizadas. Concluiu-se que houve queda considerável da integridade celular com o aumento do tempo de criopreservação.