https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/209539 2026-09-05T13:37:48Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/212458 Novos derivados do probucol e seus efeitos neuroprotetores em modelos de isquemia Vieira, Leonardo Eugênio O estresse oxidativo está envolvido na fisiopatologia de doenças neurodegenerativas, como o Alzheimer e o mal de Parkinson. É caracterizado pelo acúmulo de moléculas oxidantes no interior das células, dentre as quais estão as espécies reativas de oxigênio (ERO), que causam danos em constituintes celulares fundamentais, contribuindo eventualmente para a morte celular. Evolutivamente, as células adquiriram adaptações para contrabalancear os efeitos das EROs, uma vez que estas precisam ser mantidas em concentrações relativamente baixas para que a homeostase das células seja assegurada. Dentre estas adaptações, está a produção de proteínas antioxidantes, como a peroxirredoxina (Prx), que catalisa a redução de hidroperóxidos. Para estudar mecanismos envolvidos no estresse oxidativo, possíveis compostos protetores, como o succinobucol e a ação de proteínas antioxidantes, o verme nematódeo C. elegans representa um valioso modelo in vivo, pois além de poder ser submetido ao estresse oxidativo por exposição a compostos como o peróxido de terc-butila (t-BOOH), este animal também expressa diferentes isoformas da proteína Prx, tais como a Prx-2, sendo possível estudar sua função em cepas mutantes (nocaute) para esta proteína. Este trabalho focou em estudar os efeitos do estresse oxidativo em vermes da linhagem selvagem (N2) e nocautes para Prx-2 (VE1) na sobrevivência, reprodução, mobilidade e alimentação destes animais, e também a possível toxicidade do composto succinobucol, um derivado do probucol com propriedades antioxidantes para o C. elegans. Os vermes foram mantidos em condições padrão a 20 °C em placas NGM até atingirem o estágio larval L4, onde então foram tratados com o composto succinobucol e t-BOOH. Nossos resultados evidenciaram que o succinobucol não foi capaz de reduzir a sobrevivência dos vermes da cepa N2, sugerindo que este não possui efeito tóxico para estes animais nas concentrações utilizadas. O tratamento com o t-BOOH nas concentrações de 3 mM, 4 mM e 10 mM reduziu de maneira significativa a sobrevivência dos animais mutantes quando comparadas com o controle. No ensaio de oxidação do xilenol laranja (FOX), observou-se que tanto a cepa VE1 quanto a cepa N2 foram capazes de consumir o peróxido contido no meio, sem diferenças significativas. Os ensaios de mobilidade evidenciaram que os vermes mutantes para Prx-2 apresentaram movimentação acentuadamente reduzida no dia 9 após o tratamento, porém o grupo mutante não tratado também apresentou tal redução, indicando que o menor grau de movimentação pode não estar associado ao tratamento com o t-BOOH, mas sim ao envelhecimento do animal. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica. Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. 2020-08-27T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/212437 Papel da proteína de interação com a orredoxina (Txnip) na interrelação entre a autofagia e o inflamassoma: padronização do fracionamento subcelular concomitante das frações citoplasmáticas, nucleares e mitocondriais de tecidos cerebrais Santos, Barbara dos O isolamento de frações nucleares, citosólicas e mitocondriais com razoável pureza de tecidos e células de mamíferos tem gerado um grande interesse, pois tem a vantagem de permitir a caracterização de diferentes organelas, e determinar a localização e o tráfego de proteínas entre os mais diversos compartimentos celulares. Neste trabalho, nós descrevemos um método de fracionamento subcelular baseado em subsequentes centrifugações, onde é possível obter as frações enriquecidas de citoplasma, núcleo e mitocôndria em uma mesma preparação. Nesta metodologia foram analisadas amostras dos tecidos cerebrais de córtex e hipocampo. Para a validação da pureza das frações foi utilizada a análise de Western Blot, onde foi verificado o imunoconteúdo de proteínas marcadoras específicas para cada compartimento celular, sendo elas Peroxirredoxina 3 e Citrato Sintase (mitocondriais), Lamina B (nuclear) e Glutationa Redutase (citoplasmática). Também, realizamos a análise da atividade enzimática das enzimas citoplasmáticas Lactato Desidrogenase e Glutationa 6 Fosfato Desidrogenase, bem como das enzimas mitocôndrias Succinato Desidrogenase e Citocromo C oxidase. Como conclusão temos que este método rápido e de baixo custo permitiu o isolamento com grande pureza das frações enriquecidas de citoplasma, núcleo e mitocôndria em amostras de fatias de hipocampo e córtex cerebral. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica. Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. 2020-08-27T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/212413 Dinâmica molecular multiescala de interações proteína-proteína e proteína-lipídeo: parceiros mitocondriais da ligação de ceramidas e a indução de apoptose: dinâmica molecular de interações proteína-proteína e proteína lipídeo: os canais VDAC e a interação com a hexocinase na mitocôndria Sato, Lucas Takinami Amaral O metabolismo da mitocôndria vem se tornando alvo de estudos,por causa de seu papel fundamental no crescimento e proliferação de células cancerosas. Um melhor entendimento das interações proteicas,que compõem o sistema complexo de sinalizaçãomitocôndria/célula, pode nos trazer respostas e possíveis intervenções terapêuticas no que diz respeito ao metabolismo do câncer. O projeto focou em duas proteínas da membrana mitocondrial externa, a VDAC e a hexoquinase. Fazendo uso de metodologia unicamente computacional,procuramos entender melhor a interação entre as proteínas. Por motivos de pandemia os resultados esperados foram comprometidos, ainda assim foi vista uma interação proteína-proteína que condiz de certa forma com o posicionamento constado na literatura.Simulações futuras mais complexas serão necessárias a fim de obtermos resultados mais conclusivos. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Departamento de Bioquímica 2020-08-23T00:00:00Z https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/212395 Neurodegeneração, Neuroproteção e Neuroplasticidade, Novas Estratégias Farmacológicas de Modulação da Transmissão Glutamatérgica: avaliação in vitro e in silico da influência do sistema de sinalização purinérgica no efeito neuroprotetor da guanosina em um modelo de isquemia cerebral Corrêa, Alisson Willms O nucleosídeo de guanina (GUO) é um nucleosídeo endógeno que vem sendo mostrado como agente neuroprotetor em modelos de isquemia cerebral. A GUO previne redução da viabilidade celular, da captação de glutamato e reduz efeitos deletérios causados pela isquemia cerebral tanto em modelos in vitro quanto in vivo. Embora diversos efeitos da GUO já tenham sido descritos, os mecanismos celulares responsáveis por esses efeitos ainda não foram elucidados. Acredita-se que o sistema de transmissão purinérgica, que regula vasodilatação, sistema imune, liberação de transmissores e diversos outros processos celulares, medeiam os efeitos neuroprotetores da GUO. Este trabalho buscou avaliar a relação entre diferentes subtipos de receptores do sistema adenosinérgico e o efeito neuroprotetor da GUO in vitro, além disso, analisamos a possibilidade de uma interação direta entre a GUO e os receptores de adenosina (AdoR) in silico. Fatias de hipocampo de 400 μm de ratos Wistar machos (60-90 dias) foram submetidas a 15 minutos de privação de glicose e oxigênio (PGO), seguida de 180 minutos de reoxigenação (PGO/R). Guanosina (100 μM) e/ou DPCPX (antagonista do receptor A1, 100 nM) e CGS21680 (agonista do receptor A2a, 50 nM) foram adicionados durante o período de reoxigenação. A viabilidade celular foi determinada pela capacidade das células de reduzir brometo de 3-(4,5- dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT). O lactato extracelular (meio de incubação) foi mensurado via kit enzimático (Labtest® - Brasil). Por fim, a interação GUO-AdoR foi avaliava por análises de atracamento molecular. Fatias de hipocampo submetidas à PGO/R sofreram um decréscimo significativo na viabilidade celular e nos níveis de lactato extracelular. O tratamento com guanosina preveniu a perda a viabilidade celular e aumentou parcialmente os níveis de lactato extracelular. O agonista do receptor A1, DPCPX, suprimiu o efeito neuroprotetor da GUO, já CGS21680, um agonista do receptor A2a, apresentou efeitos semelhantes à GUO em relação a esses parâmetros. As análises de atracamento molecular mostraram resíduos de interação consistentes com os resíduos do sítio ativo, porém valores de energia livre maiores em relação ao seu ligante endógeno. Esses achados trazem novos dados sobre a importância do sistema adenosinérgico nos efeitos neuroprotetores da GUO e sugerem que uma sinalização mediada pela GUO pode ocorrer não na forma monomérica, mas na forma heterodimérica dos receptores A1-A2a. Seminário de Iniciação Científica e Tecnológica. Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. 2020-08-26T00:00:00Z