https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/277289 2026-11-10T02:41:12Z 2026-11-10T02:41:12Z Reinert, Gleice https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/277366 2026-11-04T19:02:12Z 2026-01-01T00:00:00Z

Efeito e mecanismo de ação de disruptores endócrinos no metabolismo energético e na morfologia de células de Sertoli da linhagem TM4 Reinert, Gleice As células de Sertoli exercem papel essencial na regulação do microambiente testicular, contribuem para o desenvolvimento das células germinativas por meio de funções estruturais, metabólicas, secretórias, endócrinas e parácrinas. Alterações nessas células podem comprometer a espermatogênese e a fertilidade masculina, tornando-as um modelo relevante para investigar compostos disruptores endócrinos, como o bis(2-etilhexil) ftalato (BEHP). Este estudo avaliou o efeito e o mecanismo de ação do BEHP no metabolismo energético e na secreção em células de Sertoli da linhagem TM4. As células foram expostas ao BEHP em diferentes concentrações e tempos de tratamento, sendo avaliadas quanto a parâmetros associados ao metabolismo energético e lipídico, ao estresse oxidativo, ao conteúdo proteico, à expressão gênica, à secreção de vesículas intracelulares e à citotoxicidade celular. O estudo também utilizou moduladores farmacológicos para investigar vias metabólicas e de sinalização envolvidas nas respostas celulares ao BEHP. O BEHP promoveu alterações discretas no metabolismo do lactato, incluindo aumento do conteúdo intracelular de lactato, modulação tempo-dependente da atividade intracelular da LDH e aumento da expressão relativa de RNA mensageiro (RNAm) de Slc16a3, gene que codifica o transportador de monocarboxilatos 4 (MCT4), sem alterar a expressão relativa de RNAm de Ldha e Ldhb, genes que codificam subunidades da LDH. O BEHP também estimulou a atividade da γ-glutamil transferase (GGT), e os resultados sugerem que esse efeito possa envolver mecanismos pós-transcricionais e/ou póstraducionais relacionados à tradução proteica e à glicosilação. Além disso, o BEHP induziu lipólise em células TM4, pelo menos em parte por meio da via da proteína quinase A (PKA), acompanhada de redução do conteúdo intracelular de gotículas lipídicas. O tratamento não aumentou o conteúdo intracelular de espécies reativas de oxigênio nem alterou o conteúdo de proteínas totais, indicando que os efeitos observados não parecem decorrer do aumento da produção intracelular de espécies reativas de oxigênio ou de alterações globais no conteúdo proteico celular. O BEHP também inibiu a secreção de vesículas intracelulares de forma independente do influxo de cálcio e da integridade funcional dos microtúbulos. O BEHP induziu alterações compatíveis com citotoxicidade inicial, evidenciadas pelo aumento extracelular de lactato desidrogenase (LDH) e aspartato aminotransferase (AST). Em conjunto, os resultados indicam que o BEHP afeta parâmetros funcionais importantes das células de Sertoli TM4, incluindo metabolismo energético, atividade da GGT, metabolismo lipídico, citotoxicidade inicial e secreção vesicular, sugerindo possível comprometimento de funções relevantes para a manutenção do microambiente testicular necessário à espermatogênese.; Abstract: Sertoli cells play an essential role in regulating the testicular microenvironment and contribute to germ cell development through structural, metabolic, secretory, endocrine, and paracrine functions. Alterations in these cells may impair spermatogenesis and male fertility, making them a relevant model for investigating endocrine-disrupting compounds, such as bis(2-ethylhexyl) phthalate (BEHP). This study evaluated the effect and mechanism of action of BEHP on energy metabolism and secretion in TM4 Sertoli cells. The cells were exposed to BEHP at different concentrations and treatment times and were evaluated for parameters associated with energy and lipid metabolism, oxidative stress, protein content, gene expression, intracellular vesicle secretion, and cellular cytotoxicity. The study also employed pharmacological modulators to investigate metabolic and signaling pathways involved in cellular responses to BEHP. BEHP induced discrete alterations in lactate metabolism, including an increase in intracellular lactate content, time-dependent modulation of intracellular LDH activity, and increased relative messenger RNA (mRNA) expression of Slc16a3, the gene encoding monocarboxylate transporter 4 (MCT4), without altering the relative mRNA expression of Ldha and Ldhb, genes encoding LDH subunits. BEHP also stimulated ?-glutamyl transferase (GGT) activity, and the results suggest that this effect may involve post-transcriptional and/or post-translational mechanisms related to protein translation and glycosylation. In addition, BEHP induced lipolysis in TM4 cells, at least in part through the protein kinase A (PKA) pathway, accompanied by a reduction in intracellular lipid droplet content. Treatment did not increase the intracellular content of reactive oxygen species or alter total protein content, indicating that the observed effects do not appear to result from increased intracellular production of reactive oxygen species or global alterations in cellular protein content. BEHP also inhibited intracellular vesicle secretion independently of calcium influx and the functional integrity of microtubules. BEHP induced alterations consistent with early cytotoxicity, as evidenced by increased extracellular levels of lactate dehydrogenase (LDH) and aspartate aminotransferase (AST). Taken together, the results indicate that BEHP affects important functional parameters of TM4 Sertoli cells, including energy metabolism, GGT activity, lipid metabolism, early cytotoxicity, and vesicular secretion, suggesting a possible impairment of functions relevant to maintaining the testicular microenvironment required for spermatogenesis. Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Bioquí­mica, Florianópolis, 2026.

2026-01-01T00:00:00Z